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铜绿假单胞菌菌落选择、验证及计数方法


初步分离出的菌落需进一步进行验证,根据结果进行计数。

菌落的选择、验证和计数方法如下:

1、产蓝色或绿色色素的菌落(P),挑选的可疑菌落全部进行绿脓菌素验证。

  这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:P cp/np d

  P———蓝色和绿色的菌落数;

  cp———绿脓菌素试验阳性的菌落数;

  np———进行绿脓菌素试验的蓝色和绿色菌落数;

  d———稀释因子。

2、紫外灯照射下发荧光、非蓝色且非绿色菌落(F),需按比例补做乙酰胺肉汤试验和42℃生长试验。铜绿假单胞菌的试验结果下:显砖红色的为阳性,黄色为阴性,42℃能生长。

  这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:F cF / nF d

  F———发荧光、非蓝色且非绿色的菌落数;

  cF———产氨阳性且42℃生长的菌落数;

  nF———进行产氨和42℃生长试验的发荧光、非蓝色且非绿色的菌落数;

  d———稀释因子。

3、紫外灯照射下不发荧光、红褐色菌落(R),按比例同时进行下面3种试验的验证:乙酰胺肉汤阳性、氧化酶试验阳性、金氏B阳性的菌落可确认为铜绿假单胞菌。

  这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:R cR / nR d

  R———不发荧光、红褐色的菌落数;

  c R———产氨、氧化酶、金氏 B 培养基上显荧光试验均呈阳性的红褐色菌落数;

  n R———进行产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光试验的不发荧光、红褐色菌落数。

4、其它颜色菌落,直接判断为非铜绿假单胞菌。

  上述三种确认的铜绿假单胞菌菌落的数目之和

  N = P cp / np d + F cF / nF d + R cR / nR d,即为每250 mL水样中的铜绿假单胞菌数量,结果以CFU/250mL 计,当d值为1,且N值为0时,可报告250mL水样中未检出铜绿假单胞菌。

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