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滤膜法检测产气荚膜梭菌


硝酸盐还原实验操作步骤:
1、首先,将带菌滤膜,用灭菌镊子夹住其边缘部分,带菌的一面朝上,贴在培养基上。注意:滤膜往培养基上放置时,应先让其一边的外缘接触培养基,再轻轻松开镊子,让滤膜沿着先贴紧的部位逐渐与培养基接触,直至全部贴紧。这样贴的滤膜,中间不会有气泡产生。
2、将贴上滤膜的培养基平板,倒置放于厌氧培养装置内,此处我们使用是的银河澳门官网入口厌氧产气包,厌氧培养袋和氧气指示剂。打开厌氧培养袋整理底部,将平板放入培养袋中,放入厌氧产气包,掰开氧气指示剂,待两分钟后表层变蓝,再将其置于厌氧培养袋中,将厌氧培养袋密封好。
3、36℃厌氧培养24h后,如果滤膜上长出黑色菌落,就初步怀疑是产气荚膜梭菌,可以挑取这种菌落进行进一步鉴定。
原理解释:
产气荚膜梭菌之所以能形成黑色菌落,是因为SPS培养基中含有亚硫酸钠和柠檬酸铁铵,产气荚膜梭菌可还原亚硫酸盐为硫化物,硫化物再与铁反应生成黑色硫化铁,从而使菌落中心呈现黑色;
而其它杂菌不会长出,是因为培养基中添加了多粘菌素B和磺胺嘧啶钠,能有效抑制除梭菌外的其它杂菌的生长。


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