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口腔支原体固体平板法及染色镜检


口腔支原体固体平板法操作步骤:
1.培养基的配制及灭菌:按标签说明称取海博支原体琼脂培养基(HB7025-1)加入到蒸馏水中,混匀。之后放置于灭菌锅中,121℃灭菌15分钟。
2.倒平板:培养基灭菌结束后,摇动均匀(注意:拿瓶口侧部,避免掌心紧握瓶口上部,以免被蒸汽烫伤),之后放置于水浴锅中冷至50℃,将预热至室温的马血清添加至培养基中,混合均匀后倒平板,每板20 mL即可,为提高无菌性,还可以按标签添加青霉素及醋酸铊。(注意:若培养基温度过高可能会影响血清活性,若培养基温度过低,倒板易出现结块)。
3.接菌:将活化的口腔支原体转接至精氨酸支原体肉汤中稀释10倍,之后取100 μL稀释液涂布至平板表面,不接菌的平板作为阴性对照。使用封口膜包住平板边缘。之后放置于36℃培养箱中培养7-14天。
结果观察:
取平板观察,平板由橙红(阴性对照)变粉(阳性),且在光线下可见平板表面有微小菌落,初步判定阳性结果。将平板放置于低倍镜下观察,可见煎鸡蛋状菌落,核心部分较厚,向下长入培养基,周边一层薄的透明颗粒区,可判定阳性结果。
补充-染色镜检:
为增加颜色对比度,可采用染色镜检。将结晶紫染液稀释10倍左右,直接加入到平板上染色10秒,之后用水冲洗掉,将平板放置于显微镜下观察。

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