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阴沟肠杆菌分离琼脂（ECIA）

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奶粉中阴沟肠杆菌的污染一直受到人们的关注，本视频以《SN/T 2552.7-2010 乳与乳制品卫生微生物学检验方法 第7部分：阴沟肠杆菌检验》为依据，详细讲述一下阴沟肠杆菌的分离与鉴定操作。
1.分离：轻轻混匀增菌液，用下列方法进行平板接种：
（1）直接涂布法：每份增菌液取0.2 mL加到2个阴沟肠杆菌分离琼脂平板（ECIA），每个平板0.1 mL，用无菌玻璃涂布棒涂布（如果预计奶粉中含有大量的细菌，应使用灭菌的EE肉汤将增菌液稀释10-4~10-6后涂布）。
（2）直接划线法：每份增菌液用3 mm接种环（10 μL）分别接种2个阴沟肠杆菌分离琼脂平板，三区法或四区法划线，以得到单个菌落。将平板倒置于36℃±1℃，培养18 h～22 h。
观察平板上阴沟肠杆菌的典型形态，在阴沟肠杆菌分离琼脂平板上：黄色菌落，圆形，凸起，直径2 mm~3 mm。
2.初步鉴定：从阴沟肠杆菌分离琼脂平板上挑取5个可疑菌落，分别进行初步生化试验：赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶试验。
3.对赖氨酸脱羧酶阴性、鸟氨酸脱羧酶阳性、精氨酸双水解酶阳性的可疑菌落，进行革兰氏染色，氧化酶试验。
4.对革兰氏染色阴性，氧化酶试验阴性的可疑菌落进行KCN生长试验、蔗糖、卫矛醇、棉子糖、D-山梨醇、黄色素试验。
5.若出现以上生化结果KCN生长试验+、蔗糖+、卫矛醇（－）、棉子糖＋、D-山梨醇＋、黄色素试验－，即可报告检出阴沟肠杆菌。