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肠杆菌科检验(一)样品处理和分离操作


肠杆菌科检验(一)样品处理和分离操作按照《GB 4789.41 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠杆菌科检验》标准,食品中肠杆菌科细菌的检验有两种方法。当样品中目标菌含量较高时,采用平板计数法,目标菌含量较低时,则采用MPN法进行检验计数。
1、样品处理
两种检验方法的样品处理和稀释,完全相同。都是取25g(mL)样品,加入225mL的BPW中,进行均质。然后取均质液进行10倍系列稀释。
2、分离
(1)平板计数法,是选择2-3个适宜连续稀释度的样品匀液,各取1mL分别加入无菌培养皿内,用VRBGA进行倾注后,36℃±1℃ 培养18 h~24 h,挑典型菌落划线至NA平板,培养后进一步鉴定。
(2)MPN法,是选择3个适宜连续稀释度的样品匀液,每个稀释度加入3管BPW试管中,共9管 BPW,置于 于 36℃ ±1℃ 培养 18h±2h。
然后,从每支试管中,分别吸取1mL增菌液,加入10mLEE肉汤管,EE肉汤管编号与BPW一一对应。36℃±1℃ 培养 24 h±2 h。
从每支EE肉汤管中分别取1环培养物,划线接种于VRBGA平板,36℃±1℃培养24 h±2 h,观察平板上有无典型菌落。挑典型菌落划线至NA平板,培养后进一步鉴定。
两种方法分离出的典型菌落,均不能直接进行计数,尚需进一步鉴定确认后,才能按相关方法进行计数。有关肠杆菌科细菌鉴定方法、结果判定和计数方法等内容,待后续视频讲解。
注意事项:
(1)MPN法中,每个试管都要有唯一编号,且编号与平皿上的编号一致,避免混淆。
(2)有关计数:VRBGA上的可疑菌必须经过进一步鉴定确认后,才能进行计数。

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