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    大肠埃希氏菌计数(四)平板计数法及结果报告


    大肠埃希氏菌计数(四)平板计数法及结果报告大肠埃希氏菌平板计数法是利用大肠埃希氏菌在VRBA-MUG上显蓝白色荧光,来计数大肠埃希氏菌的,相比于MPN法,操作过程更加简单,但此种方法,不适用于贝类。
    1、 倾注平板
    首先,取VRBA、VRBA-MUG培养基,按照标签说明进行称量溶解,将VRBA、VRBA-MUG培养基,置于微波炉上加热煮沸灭菌,煮沸2-3次,之后放置于45℃±0.5℃水浴锅中备用。
    选取2个~3个适宜的连续稀释度的样品匀液,本次采用原液、-1、-2梯度的样品匀液进行实验,每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿1 mL。同时取1 mL稀释液加入无菌平皿做空白对照。同时采用已知MUG阳性菌株(如大肠埃希氏菌25922)和产气肠杆菌(如ATCC 13048)做阳性和阴性对照。
    将10 mL~15 mL冷至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每个平皿中(注意:倾注时的温度不能过高,否则会发生菌株死亡)。小心旋转平皿,将培养基与样品匀液充分混匀。(注意1:可在需倾注的平皿下方叠放一个空平皿,防止桌面太待琼脂凝固后,再加3 mL~4 mL VRBA-MUG覆盖平板表层,凝固后翻转平板,36℃±1℃培养18 h~24 h。
    2、 平板菌落数的选择
    选择菌落数在10 CFU~100 CFU之间的平板,暗室中360 nm~366 nm波长紫外灯照射下,计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。
    3、 大肠埃希氏菌平板计数的报告
    两个平板上发荧光菌落数的平均数乘以稀释倍数,报告每g(mL)样品中大肠埃希氏菌,以CFU/g(mL)表示。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。

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