银河澳门官网入口,银河集团网址登录



银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->海博原创文章——知识拓展->罗氏培养基斜面管制备方法及注意事项

罗氏培养基斜面管制备方法及注意事项

纪旭艳
录入时间:2022-11-24 11:39:46 来源:青岛银河澳门官网入口

一、用途及原理

  罗氏培养基常用于培养分枝杆菌,特别是用于结核分枝杆菌的分离培养及卡介苗的传代和保存。结核分枝杆菌为专性需氧菌,营养要求较高,能耐酸,最适生长pH为6.5-6.8,生长缓慢,必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。罗氏培养基中的全蛋液营养丰富,可促进分枝杆菌快速生长,培养基中的孔雀绿可抑制部分杂菌的生长。


二、培养基配方

磷酸二氢钾

2.4g

硫酸镁

0.24g

柠檬酸镁

0.6g

L-谷氨酸钠

7.2g

孔雀绿

0.4g

马铃薯淀粉

30.0g

甘油

12mL

蒸馏水

600mL

全蛋液

1000mL

  注:由痰等标本中分离分枝杆菌时,若前处理方法为碱性物质,可将培养基中的磷酸二氢钾由2.4g增加至14g,即可制成酸性罗氏培养基;若前处理方法为酸性物质,可将培养基中的2.4g磷酸二氢钾改为3.6g磷酸氢二钾,即可制成碱性罗氏培养基。


三、配制方法

  (1)基础培养基:称取除全蛋液以外的成分加热煮沸溶解于600mL纯化水中,加热过程需不停搅拌以防止马铃薯粉凝成块或糊底,121℃灭菌15min,冷却至55℃备用;

  (2)全蛋液制备:将新鲜鸡蛋洗刷外壳后,浸于5%碳酸钠溶液中约30min,用清水冲洗后,浸泡于75%乙醇溶液中数分钟,在无菌环境中用灭菌的镊子或其他器具打破蛋壳,将蛋液倒入含玻璃珠的无菌锥形瓶中(可预先将玻璃珠放入锥形瓶中,121℃高压蒸汽灭菌15-30min),充分摇晃使蛋黄、蛋白摇散混合均匀。

  注:新鲜鸡蛋内的蛋液通常是无菌的,无须进行灭菌处理,操作过程应注意避免污染。若蛋液中可能残存蛋壳碎渣,可将打散后的全蛋液用无菌纱布进行过滤。

  (3)将1000mL全蛋液与600mL基础溶液混合充分摇匀,无菌分装于灭菌的试管中,每管5-7mL(视试管的大小调整装量),摆长斜面,用85-90℃流动蒸汽灭菌1-1.5h至斜面完全凝固,取出冷却后备用。制备好的罗氏培养基斜面应呈微绿色或黄绿色。

  注:不同于一般的培养基,此培养基中不使用琼脂,而是通过蛋液的凝固效果制成固体培养基,因此硬度较低,且分枝杆菌生长周期长,为防止培养基过分失水变干,通常使用试管制成斜面使用而不是做成平板(平板通常培养3-5天后会有明显失水变薄现象,而分枝杆菌通常需要培养数周的时间)。将蛋液与基础培养基混合时,应缓慢倒入轻轻摇匀,防止产生过多气泡。85-90℃的流动蒸汽可以保持蛋液中的维生素不被破坏,也可使用凝固器加温至85-90℃,若无流动蒸汽灭菌器和凝固器,也可使用烘箱调节至85-90℃使培养基凝固。


相关产品:

改良罗氏培养基基础-点击查看产品详情

酸性罗氏培养基基础-点击查看产品详情

酸性罗氏培养基管(4ml)-点击查看产品详情


注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。


 

上一篇:影响芽孢形成的因素

下一篇:常用金黄色葡萄球菌分离培养基比较

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294