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改良克氏双糖铁培养基原理及现象

纪旭艳
录入时间:2021-6-7 13:34:22 来源:青岛银河澳门官网入口

一、用途及原理


 用于细菌的复合生化试验鉴定(葡萄糖、山梨醇),常用于小肠结肠炎耶尔森氏菌生化鉴定。


 蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉提供细菌生长所需的基本营养;氯化钠维持渗透压,山梨醇和葡萄糖为可发酵碳源,硫酸亚铁和硫代硫酸钠可检测细菌是否产硫化氢,琼脂为凝固剂,酚红为酸碱指示剂,酸性条件下呈黄色,碱性条件下呈红色。


 培养基中含有少量的葡萄糖(1g/L)和较多的山梨醇(20g/L)两种碳源,若细菌仅能发酵葡萄糖而不能发酵山梨醇,在培养基中产酸较少,在斜面处的酸受空气氧化生成碱性物质,pH较高显红色,底层少量酸不被氧化,pH下降显黄色;若细菌能发酵山梨醇,在培养基中产生大量酸,整个培养基pH下降,斜面和底层均显黄色。若细菌仅能氧化利用葡萄糖或不能利用葡萄糖,则培养基斜面和底层均为红色。若细菌分解葡萄糖或山梨醇产气,可观察到气泡或断层现象。产硫化氢细菌可还原硫代硫酸钠、硫酸亚铁生成硫化氢,与培养基中亚铁离子反应生成黑色的硫化亚铁,可观察到底层变黑。


二、培养基配方(g/L)


蛋白胨

15.0

酵母浸粉

3.0

牛肉浸粉

3.0

月示蛋白胨

5.0

氯化钠

5.0

山梨醇

20.0

葡萄糖

1.0

硫酸亚铁

0.2

硫代硫酸钠

0.3

琼脂

13.0

酚红

0.024

pH7.4±0.2
25℃

三、使用方法及注意事项


 1.称取本品65.52g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装至试管,121℃高压灭菌15分钟。

 注:分装前要保证琼脂溶解充分,否则分装后的试管可能不凝固。


 2.灭菌结束后,趁热将培养基摆高层斜面(斜面:底层=2:3),凝固后备用。


 3.接种:用接种针挑取待测菌菌落,在斜面“之”字形划线并穿刺底层,置于相应温度下培养。

 注:培养基斜面需要与氧气充分发生反应,因此培养过程中试管必须确保使用透气性良好的塞子,严禁密闭培养,否则可能导致试验结果不正确。


 4.结果观察及记录:培养结束后,记录斜面及底层的颜色(通常红色代表产碱,用“K”表示,黄色代表产酸,用“A”表示)、是否出现断层及变黑现象。


四、试验现象与解释


 接种以下质控菌株,在25±1℃需氧培养24小时:

质控菌株

菌株编号

生长情况

其他特征

鼠伤寒沙门氏菌

ATCC14028

+++

A/A,H2S+,产气

普通变形杆菌

ATCC13315

+++

K/A,H2S+,产气

小肠结肠炎耶尔森氏菌

CMCC52204

+++

A/A,H2S-,不产气

福氏志贺氏菌

ATCC12022

+++

K/A,H2S-,不产气


 改良克氏双糖铁试验现象:


 试验现象解释:

 鼠伤寒沙门氏菌可发酵葡萄糖产酸产气,并发酵山梨醇产酸,产硫化氢,可观察到培养基整体显黄色,有断层,底部有变黑;

 普通变形杆菌可发酵葡萄糖产酸产气,但不能发酵山梨醇产酸,产硫化氢,可观察到培养基斜面红色,底层黄色并有变黑,有断层;

 小肠结肠炎耶尔森氏菌可发酵葡萄糖和山梨醇产酸,但不产气,不产硫化氢,可观察到培养基整体显黄色,无断层,底层不变黑;

 福氏志贺氏菌发酵葡萄糖产酸不产气,不能发酵山梨醇,不产硫化氢,可观察到培养基斜面红色,底层黄色不变黑,无断层。


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 注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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