一、用途及原理

 用于细菌的复合生化试验鉴定（葡萄糖、山梨醇），常用于小肠结肠炎耶尔森氏菌生化鉴定。

 蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉提供细菌生长所需的基本营养；氯化钠维持渗透压，山梨醇和葡萄糖为可发酵碳源，硫酸亚铁和硫代硫酸钠可检测细菌是否产硫化氢，琼脂为凝固剂，酚红为酸碱指示剂，酸性条件下呈黄色，碱性条件下呈红色。

 培养基中含有少量的葡萄糖（1g/L）和较多的山梨醇（20g/L）两种碳源，若细菌仅能发酵葡萄糖而不能发酵山梨醇，在培养基中产酸较少，在斜面处的酸受空气氧化生成碱性物质，pH较高显红色，底层少量酸不被氧化，pH下降显黄色；若细菌能发酵山梨醇，在培养基中产生大量酸，整个培养基pH下降，斜面和底层均显黄色。若细菌仅能氧化利用葡萄糖或不能利用葡萄糖，则培养基斜面和底层均为红色。若细菌分解葡萄糖或山梨醇产气，可观察到气泡或断层现象。产硫化氢细菌可还原硫代硫酸钠、硫酸亚铁生成硫化氢，与培养基中亚铁离子反应生成黑色的硫化亚铁，可观察到底层变黑。

二、培养基配方（g/L）

蛋白胨	15.0
酵母浸粉	3.0
牛肉浸粉	3.0
月示蛋白胨	5.0
氯化钠	5.0
山梨醇	20.0
葡萄糖	1.0
硫酸亚铁	0.2
硫代硫酸钠	0.3
琼脂	13.0
酚红	0.024
pH7.4±0.2	25℃

三、使用方法及注意事项

 1.称取本品65.52g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装至试管，121℃高压灭菌15分钟。

 注：分装前要保证琼脂溶解充分，否则分装后的试管可能不凝固。

 2.灭菌结束后，趁热将培养基摆高层斜面（斜面:底层=2:3），凝固后备用。

 3.接种：用接种针挑取待测菌菌落，在斜面“之”字形划线并穿刺底层，置于相应温度下培养。

 注：培养基斜面需要与氧气充分发生反应，因此培养过程中试管必须确保使用透气性良好的塞子，严禁密闭培养，否则可能导致试验结果不正确。

 4.结果观察及记录：培养结束后，记录斜面及底层的颜色（通常红色代表产碱，用“K”表示，黄色代表产酸，用“A”表示）、是否出现断层及变黑现象。

四、试验现象与解释

 接种以下质控菌株，在25±1℃需氧培养24小时：

 改良克氏双糖铁试验现象：

 试验现象解释：

 鼠伤寒沙门氏菌可发酵葡萄糖产酸产气，并发酵山梨醇产酸，产硫化氢，可观察到培养基整体显黄色，有断层，底部有变黑；

 普通变形杆菌可发酵葡萄糖产酸产气，但不能发酵山梨醇产酸，产硫化氢，可观察到培养基斜面红色，底层黄色并有变黑，有断层；

 小肠结肠炎耶尔森氏菌可发酵葡萄糖和山梨醇产酸，但不产气，不产硫化氢，可观察到培养基整体显黄色，无断层，底层不变黑；

 福氏志贺氏菌发酵葡萄糖产酸不产气，不能发酵山梨醇，不产硫化氢，可观察到培养基斜面红色，底层黄色不变黑，无断层。

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