一、用途：
用于检验弧菌的β-半乳糖苷酶的产生能力，亦可用之鉴别迟缓发酵糖细菌与乳糖阴性细菌。
二、实验原理：
细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一种是β-半乳糖苷酶渗透酶，它位于细胞膜上，可送乳糖分子渗入细胞，另一种β-半乳糖苷酶，亦称乳糖酶，位于细胞内，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。
具有上述两种酶的细菌，能在24-48h发酵乳糖，而缺乏此两种酶的细菌，不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷渗透酶，因而乳糖进入细胞很慢，需经培养基中1%乳糖较长时间的诱导，产生相当数量的渗透酶后，才能较快分解乳糖，故呈迟缓发酵现象。
ONPG可迅速进入细菌细胞，被β-半乳糖苷酶水解，释放出黄色的临位硝基苯酚，故由培养液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在，从而确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。
三、试验方法：
1.用磨砂轮在安瓿瓶颈部划线一圈，掰开待用；
2.将待检培养物接种3%氯化钠三糖铁琼脂，36±1℃培养18h；
3.挑取1满环新鲜培养物接种于生化管中，在通风橱中滴加1滴甲苯，摇匀后置37℃水浴5min后，置于36±1℃培养24h，观察实验结果。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株，在36±1℃培养18-24小时：
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质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
|
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
- |
阴性，颜色不变 |
|
霍乱弧菌 |
/ |
- |
阳性，变黄 |
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溶藻弧菌 |
ATCC17749 |
- |
阴性，颜色不变 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
- |
阳性，变黄 |
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创伤弧菌 |
ATCC27562 |
- |
阳性，变黄 |
3%Nacl ONPG生化管质控结果
备注：a:副溶血性弧菌，b:霍乱弧菌，c:溶藻弧菌，d:大肠埃希氏菌，e:创伤弧菌，f:空白对照
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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