一、试验原理：
用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别。
蛋白胨和酵母粉提供碳氮源和微量元素；葡萄糖是可发酵的糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；中性红为pH指示剂，琼脂是培养基的凝固剂。
二、培养基配方（g/L）：
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酵母粉 |
3.0 |
|
蛋白胨 |
7.0 |
|
氯化钠 |
5.0 |
|
葡萄糖 |
10.0 |
|
胆盐 |
1.5 |
|
结晶紫 |
0.002 |
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中性红 |
0.03 |
|
琼脂 |
13.0 |
|
pH 7.3±0.2 25℃ |
|
三、试验方法：
粉体装培养基的使用：
1.称取本品39.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸不要超过2分钟，冷却至50℃左右时，倾入无菌平皿。无需高压灭菌。
2.使用前，把制备好的平板放置室温10-20分钟。
3.制备质控菌液。
4. 选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml，均匀涂布于待测平板以及参比平板上，每一稀释度接种两个平板。
5．用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板。
6. 36±1℃倒置培养基培养18-24小时，记录实验结果。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
|
粪肠球菌 |
ATCC29212 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤5 |
/ |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC8739 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
红色菌落，有胆盐沉淀环 |
|
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
20-200 |
PR≥0.7 |
红色菌落，有胆盐沉淀环 |
||
|
福氏志贺氏菌 |
CMCC(B)51572 |
20-200 |
PR≥0.7 |
红色菌落，有胆盐沉淀环 |
图1-2 肠道菌计数琼脂（VRBDA）微生物质控结果
备注：a:粪肠球菌，b:大肠埃希氏菌，c:鼠伤寒沙门氏菌，d:福氏志贺氏菌
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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