用途:用于细菌DNA酶检测。
原理:胰蛋白胨和大豆胨提供碳源和氮源;有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸(DNA),使DNA长链水解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链;氯化钙提供阳离子作为激活剂;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。将盐酸滴在培养基表面,如DNA酶阳性,其菌落周围可以产生明显透明环,如DNA酶阴性,盐酸与完整的脱氧核糖核酸反应,可形成浑浊的沉淀;如果加入0.1%甲苯胺蓝溶液,甲苯胺蓝为指示剂,DNA酶阳性时,水解DNA部分为蔷薇色;DNA酶阴性时,甲苯胺蓝显蓝色。
操作步骤:
使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。
1、制备质控菌液。
2、将质控菌液划线于平板上。
3、36±1℃倒置培养基培养18-24小时,培养结束后滴加1N盐酸,记录实验结果。
微生物试验:
接种以下质控菌株,36±1℃倒置培养基培养18小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
+++ |
DNA酶阳性,菌落周围有透明环 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
+++ |
DNA酶阳性,菌落周围有透明环 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
+++ |
DNA酶阴性,菌落周围无透明环 |
图1-1 DNA酶琼脂微生物质控结果
备注:a:金黄色葡萄球菌(ATCC25923);b:金黄色葡萄球菌(ATCC6538);c:大肠埃希氏菌
方法的局限性
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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