一、试验原理:
培养基用于产气荚膜梭菌的平板计数(GB标准)。培养中的胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;亚硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生,产气荚膜梭菌可还原亚硫酸盐为硫化物,硫化物与铁反应生成黑色硫化铁,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;多粘菌素B和磺胺嘧啶钠抑制非梭菌的细菌。
二、培养基配方(g/L):
胰酪蛋白胨 酵母浸粉 柠檬酸铁 亚硫酸钠 琼脂 pH值7.0±0.1(25℃) |
15.0 10.0 0.5 0.5 15.0
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三、试验方法:
1)加热溶解以上各组分,待冷却后调节pH至7.0±0.1(25℃),分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟,却至50℃时,每100ml培养基加入1支多粘菌素B硫酸盐溶液(1.2mg)和1支磺胺嘧啶钠溶液(12mg),混匀,倾入无菌平皿,备用。
2)采用滤膜法,取50mL的水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤,然后将滤膜移至SPS琼脂培养基上,倒置于36℃±1℃厌氧培养24h,计数黑色菌落。
四、试验结果判断:
产气荚膜梭菌在滤膜上的单菌落呈黑色,任意挑取3个至5个在滤膜上生长的黑色菌落,分别接种FT培养基,于36℃±1℃厌氧培养18h-24h后,将培养物做确证试验,根据试验结果确证产气荚膜梭菌的存在。
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