一、用途
用于同时检测肠杆菌科细菌的赖氨酸脱羧酶和产硫化氢试验,特别用于检测沙门氏菌和亚利桑那菌。
二、成分（g/L）及原理
蛋白胨............................5.0
葡萄糖............................1.0
酵母浸粉..........................3.0
L-赖氨酸盐酸盐....................10.0
硫代硫酸钠........................0.04
柠檬酸铁铵........................0.5
溴甲酚紫..........................0.02
琼脂..............................12.5
pH6.7±0.2 at 25℃
培养基中的蛋白胨和酵母浸粉提供基本营养物质，葡萄糖为唯一可发酵碳源，硫代硫酸钠可用于检测硫化氢的生成，溴甲酚紫为酸碱指示剂。若细菌仅能发酵葡萄糖，则产酸使培养基变黄，斜面由于产酸较少被氧化生成碱性物质，底层不被氧化，因此斜面显紫色底层显黄色。有些细菌具有赖氨酸脱羧酶，使赖氨酸脱羧产碱，底层又变成紫色。有些细菌可还原硫代硫酸钠产生硫化氢，并与柠檬酸铁铵反应生成黑色沉淀。
三、试验方法
1、称取本品32.0g，加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，分装试管，121℃高压灭菌15min，冷至60℃左右时，制成斜面。
2、将质控菌株划线后穿刺接种到培养基上。
3、放置于35±1℃恒温培养箱中需氧培养24±2小时。
四、结果观察
接种以下质控菌株，放置于35±1℃恒温培养箱中需氧培养24±2小时。
|
质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其它特征 |
|
亚利桑那沙门氏菌 |
CMCC(B) 47001 |
+++ |
斜面紫色，底层紫色，产硫化氢 |
|
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC 14028 |
+++ |
斜面紫色，底层紫色，产硫化氢 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
+++ |
斜面紫色，底层紫色，不产硫化氢 |
图1 赖氨酸铁琼脂（LIA）培养基微生物质控结果
五、与三糖铁琼脂（TSI）对比
三糖铁琼脂（TSI）和赖氨酸铁琼脂（LIA）均用于沙门氏菌的检测。TSI中除葡萄糖，还含有乳糖和蔗糖，绝大多数沙门氏菌不发酵乳糖和蔗糖，产硫化氢，因而在TSI上呈斜面红色，底层黄色，有黑色沉淀。而亚利桑那沙门氏菌中部分菌株可以发酵乳糖，在TSI上呈现出斜面黄色，底层黄色，产硫化氢，这一现象与普通变形杆菌相同（普通变形杆菌发酵蔗糖不发酵乳糖，产硫化氢）。奇异变形杆菌（发酵葡萄糖，不发酵乳糖和蔗糖，产硫化氢）在TSI上呈斜面红色，底层黄色，并有黑色沉淀，与多数沙门氏菌现象一致。因此，在TSI上很难将变形杆菌与沙门氏菌区分开。在LIA上，多数沙门氏菌（包括亚利桑那沙门氏菌）由于赖氨酸脱羧酶阳性，产硫化氢，因而表现出斜面紫色、底层紫色，底层有黑色沉淀。而变形杆菌不能将赖氨酸脱羧产碱，因而表现出斜面紫色，底层黄色，底层有黑色沉淀。与TSI相比，LIA能将沙门氏菌与变形杆菌区分开来，特别是有利于亚利桑那沙门氏菌的检测。
图2 LIA与TSI斜面上沙门氏菌和变形杆菌的对比
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