一、试验原理：
明胶液化（gelaune liquefaction）指细菌把明胶分解成液状的现象。这是因为有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，使其失去凝胶性质，从而使半固体的明胶培养基成为流动的液体，即液化。这种能力因细菌种类不同而有显著差异，因此很早以来就被作为鉴别、测定细菌的一种特征。例如：葡萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。
该培养基中蛋白胨和牛肉膏粉为微生物生长提供氮源、维生素、矿物质；某些含明胶酶的细菌水解明胶，使其液化而降低明胶的胶凝作用。
二、 试验方法：
a 称取适量明胶培养基(营养明胶)，加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管高层，116℃高压灭菌15min，垂直放置待培养基凝固后，备用；
b 挑取18~24h待检验培养物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基；
c 于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可于36±1℃培养。
d 每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、将接种物放于2—8℃约10—30min待降温后取出观察，若果确实被液化，即为试验阳性；平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10~20min后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。
三、临床应用：
临床上主要用于肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶。
四、注意事项：
（1）如有的菌在20℃不生长则在30℃培养生长后，观察时放冰箱或冷水中降温，待对照管凝固后再记录。
（2）灭菌过高或过低会影响结果，一般用116℃蒸汽灭菌15min较为合适。
五、常见问题：
问：明胶培养基放在37°培养了两天后液态了,再放到4度冰箱里又变成固态了，网上说30min后取出观察是立即观察还是要放室温呀?
答：是立即观察。倾斜试管看看表层是否有被液化的迹象，如果有液化则表层软化出现流动状，如果不被液化则完全凝固。一般认为明胶的凝固点是24℃，不过各批次明胶差异很大，所以要放在冰箱后观察。按你说的放在4℃冰箱里又变成固态了，那就是还没有出现明胶液化。不过这个实验要培养7天的。
问：明胶培养基放入培养箱会液化怎么回事？
答：两种可能：（1）某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体；（2）明胶的熔点较低,如果放到37°或更高的温度下，则明胶自身就容易液化，出现假阳性结果。
问：明胶液化温度为24℃，其培养温度一般为20℃，但是为什么明胶高层可以在36℃下培养，什么是明胶高层？
答：你所说的“明胶高层”其实并不是一个词语，应该分解为“明胶”和“高层”两个词语。意即：在营养明胶培养基的高层，或者更明确的说是上层。
这个是明胶液化试验，是一种生理生化试验，目的在于鉴定细菌。由于有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。
所谓的22℃或36℃其实是同一个试验，只是接种后的培养温度不同而已。用琼脂培养物穿刺接种，然后放在22~25℃培养，每天观察记录液化时间。或者是放在36℃左右培养，每天取出，放在冰箱内30分钟后再观察结果。
之所以有这两个温度，是怕有些菌种在22-25℃下不易生长，所以置于36℃培养。
问：明胶液化实验中明胶可以用琼脂代替吗？
答：不行。明胶和琼脂性质不同，对于这个实验，可认为是完全不同的东西。
问：做生理生化反应,配制明胶液化培养基：蛋白胨5个、葡萄糖20g、明胶200g,加水至1L，pH7.4，121度灭菌30分钟，灭菌后水浴降温，但仍为液体，配了2次了都不凝？
答：凝胶本质是蛋白质啊，这样长时间高温灭菌，会使明胶水解，不再凝固! 该培养基通常采用116℃灭菌15分钟。
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