一、试验原理：
1.三糖铁琼脂（TSI）试管中的三糖分别为葡萄糖、乳糖及蔗糖，其中葡萄糖含量少，仅为乳糖或蔗糖的1/10。细菌分解糖类时产酸会使pH降低，斜面和底层呈黄色：①若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因葡萄糖含量较少，所生成的少量酸由于接触空气氧化，且细菌生长繁殖过程中利用含氮物质生成碱性化合物中和，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所产生的酸一时不被氧化而仍保持黄色。②若细菌可以分解葡萄糖、乳糖及蔗糖，产酸多，斜面和底层都呈黄色。③若细菌不能发酵糖类，则斜面和底层不变色，呈红色。
2.细菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖产酸的同时会产气，试管中会出现断层。
3.细菌产生硫化氢会与培养基中的硫酸亚铁反应生成黑色的硫化铁，形成黑色区域。
二、试验结果判断：
常见的试验结果有如下几种：
1. 斜面红色/底层红色：不能发酵葡萄糖、乳糖及蔗糖，是非发酵菌的特征，如铜绿假单胞菌。
2. 斜面红色/底层黄色：发酵葡萄糖但不发酵乳糖和蔗糖，是不发酵乳糖菌的特征，如志贺氏菌。
3. 斜面红色/底层黄色（部分区域黑色）：发酵葡萄糖但不发酵乳糖和蔗糖同时产生硫化氢，是产硫化氢且不发酵乳糖菌的特征，如沙门氏菌、亚利桑那菌、枸橼酸杆菌和变形杆菌等。
4. 斜面黄色/底层黄色：发酵葡萄糖、乳糖及蔗糖，是发酵乳糖的大肠菌群的特征，如大肠杆菌、克雷伯菌属和肠杆菌属等。
三、注意事项：
检验产硫化氢可疑菌时应及时观察试验结果，以免生成的硫化铁形成黑色区域，遮盖斜面与底层的颜色影响试验结果的判断。
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