维生素B12测定培养基是一种微生物检测液体培养基，主要用于婴儿食品和乳粉中维生素B12测定。
该培养基的配制及使用方法为：称取本品 7.6g加热搅拌溶解于 100ml蒸馏水中,煮沸 2-3分钟,分装试管,每管 5ml，使沉淀物分散均匀，加入标准品或测试样品，用蒸馏水补体积至 10ml,121℃高压灭菌 5分钟，备用。具体维生素B12的测定方法参照GB 541314-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定。
由于维生素B12在某些特定环境中极易分解，测定维生素B12的实验过程要求严格，因此要格外注意以下几点：
1.准备玻璃仪器时，使用活性剂对硬玻璃测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗，清洗之后要求在200℃干热2 h。
2.使用本品前必须检查培养基是否超出质保期，有无污染、吸潮结块现象，高压灭菌后是否有沉淀，如存在上述问题不得使用。
3.为保证实验结果准确，样品必须尽快接种培养，实验全过程避光，忌高温，控制培养pH 5.5-6.3（pH用1N的HCL和1N的NaOH调制）。
4.灭菌：121℃高压灭菌 5分钟后迅速冷却使用为宜。
5.培养基仅用于外部诊断。
6.培养后须做灭菌处理。
为什么实验过程要保持避光？
主要是由于维生素B12见光（紫外线）极易分解，若不避光将会严重影响测定结果，甚至导致标准曲线难以测定。
为什么维生素B12测定培养基高压灭菌时间短？
因为维生素B12测定培养基中含有大量的氨基酸、嘌呤、糖等物质，如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
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