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微生物检验新理念



录入时间:2016-4-25 14:36:30 来源:青岛银河澳门官网入口

1、风险管理、风险调查/评估

*实验环境、器材、方法的要求大幅度提高

*各种SOP越来越细化

药品微生物的风险管理

 

中检院无菌室万级区域浮游菌分布图

 

近六年无菌室万级浮游菌高限图

 

洁净室使用次数与浮游菌数关系

 

环境微生物归属

 

2、检验理念的转变

*检验方法个性化

*微生物鉴定由形态、生化鉴定向分子生物学鉴定发展

①实验者由严格按照标准检验,向按统一原则,选择适宜的方法转变

 

2015版中国药典致病菌鉴定策略的转变

*利用规定的选择培养基初筛;

*自己选择确证方法

*建议采用分子遗传学方法,以最新版的《伯杰氏细菌学鉴定手册》为金标准(微生物限度检查法应用指导原则)。

2010版中国药典沙门菌(Salmonella)的鉴别

1.取培养物1ml,接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中,培养18-24小时后,分别划线接种与胆盐硫乳琼脂(或沙门、志贺菌属琼脂)培养基和麦康凯琼脂(或曙红亚甲蓝琼脂)培养基平板上,培养18-24小时,(必要时延长至40-48小时)。若平板上无菌落生长,或生长的菌落不同于表6所列的特征,判供试品未检出沙门菌。

6 沙门菌菌落形态特征

培养基

菌落形态

胆盐硫乳琼脂

无色至浅橙色,半透明,菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色

沙门、志贺菌属琼脂

无色至淡红色,半透明或不透明,菌落中心有时带黑褐色

曙红亚甲蓝琼脂

无色至浅橙色,透明或半透明,光滑湿润的圆形菌落

麦康凯琼脂

无色至浅橙色,透明或半透明,菌落中心有时为暗色

2.若平板上生长的菌落与表6所列的菌落形态特征相符或疑似,用接种针选2-3个菌落分别用于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种,培养18-24小时,如斜面未见红色,底层未见黄色;或斜面黄色、底层无黑色,判供试品未检出沙门菌。

3.否则,应取三糖铁琼脂培养基斜面上的培养物进行适宜的生化试验和血清凝集试验,确认是否为沙门菌。

注意:利用多种选择培养基(特定的营养条件和生态学环境),通过菌落形态、代谢物显色反应等,采用排除法鉴别。

选择和分离培养 取预培养物0.1ml接种至10mlRVS增菌肉汤中,30-35℃培养18-24小时,取少量RVS沙门菌增菌肉汤培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上,30-35℃培养18-48小时。

沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上生长良好,菌落为红色,中心有或无黑色。用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行谢苗和高层穿刺接种,培养18-24小时,或采用其他适宜的方法进一步鉴定。

结果判断 若木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂平板上有疑似菌落生长,且三糖铁琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色,或斜面黄色、底层黑色,应进一步进行适宜的鉴定试验,确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长,但鉴定结果为阳性,或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色;或斜面黄色、底层无黑色,判供试品未检出沙门菌。

 

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