本法系依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用，比较对调品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，检查供试品中氨苄西林或四环素残留量。
磷酸盐缓冲液（P H6 .0 )的制备 称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2.0g，加水溶解并稀释至1000ml，经121°C灭菌3 0分钟。
抗生素I 号培养基的制备 称取胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g，加人适量水溶解后，加人琼脂13〜1 4 g ,加热使之溶胀，滤过除去不溶物，加人葡萄糖lg , 溶解后加水至1000ml，调p H 值使灭菌后为6. 5〜6. 6; 分装于玻璃管或锥形瓶中，经115°C灭菌30分钟，4℃保存。
对照品溶液的制备 取氨苄西林对照品适量，用O.Olmol/L盐酸溶解并稀释成每lm l中含氨苄西林10mg的溶液，精密量取适量，用磷酸盐缓冲液稀释成每lm l中含l.O μg的溶液。
取四环素对照品适量，用生理氯化钠溶液溶解并稀释成每lm l中含0. 125μg的溶液。
菌悬液的制备 （1 )金黄色葡萄球菌悬液用于检测氨苄西林。取金黄色葡萄球菌（CMCC26003)营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，35〜37°C培养20〜2 2小时。临用时，用灭菌水或0 .9%无菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
(2 )藤黄微球菌（Mz'crococcwWi^eMS)悬液用于检测四环素。取藤黄微球菌[CMCC(B)28001] 营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，置26〜2 7C培养2 4小时。临用时，用0 .9%无菌氣化钠溶液将菌苔洗下，备用。
检査法 取直径8cm或10cm的培养皿，注人融化的抗生素I I号培养基15〜20ml，使在碟底内均勻摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。取抗生素II号培养基10〜15ml置于1支50°C水浴预热的试管中，加人0.5%〜1.5% (ml/ml) 的菌悬液300μl混匀，取适量注人已铺制底层的培养皿中，放置水平台上，冷却后，在每个培养皿上等距离均勻放置钢管(内径6〜8mm、壁厚1〜2mm、管髙10〜15mm的不绣钢管，表面应光滑平整），于钢管中依次滴加供试品溶液、阴性对照溶液（磷酸盐缓冲液）及对照品溶液。培养皿置37℃培养18〜22小时。
结果判定 对照品溶液有抑菌圈，阴性对照溶液无抑菌圈。供试品溶液抑菌圈的直径小于对照品溶液抑菌圈的直径时判为阴性；否则判为阳性。
【附注】本试验应在无菌条件下进行，使用的玻璃仪器、钢管等应无菌。
