1 范围

本标准规定了食品中β 型溶血性链球菌（Streptococcus）的检验方法。

本标准适用于食品中β 型溶血性链球菌的检验。

2 术语和定义

2.1 β 型溶血

在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。

2.2 β 型溶血性链球菌

能够产生β 型溶血的化脓（或A 群）链球菌（Streptococcus pyogenes）和无乳（或B 群）链球菌

（Streptococcus agalactiae）。

3 设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a) 恒温培养箱： 36 ℃±1 ℃；

b) 冰箱：2 ℃～5 ℃；

c) 厌氧培养装置；

d) 天平：感量0.1 g；

e) 均质器与配套均质袋；

f) 显微镜：10 倍～100 倍；

g) 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头；

h) 无菌锥形瓶：容量100 mL、200 mL、2 000 mL；

i) 无菌培养皿：直径90 mm；

j) pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸；

k) 水浴装置：36 ℃±1 ℃；

l) 微生物生化鉴定系统。

4 培养基和试剂

4.1 改良胰蛋白胨大豆肉汤（Modified tryptone soybean broth, mTSB）：见附录A 中A.1。

4.2 哥伦比亚CNA 血琼脂(Columbia CNA blood agar)：见附录A 中A.2。

4.3 哥伦比亚血琼脂(Columbia blood agar)：见附录A 中A.3。

4.4 革兰氏染色液：见附录A 中A.4。

4.5 胰蛋白胨大豆肉汤（Tryptone soybean broth, TSB）：见附录A 中A.5。

4.6 草酸钾血浆：见附录A 中A.6。

4.7 0.25％氯化钙(CaCl2)溶液：见附录A 中A.7。

4.8 3％过氧化氢(H2O2)溶液：见附录A 中A.8。

4.9 生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。

5 检验程序

溶血性链球菌检验程序见图1。

6 操作步骤

6.1 样品处理及增菌

按无菌操作称取检样25 g（mL），加入盛有225 mL mTSB 的均质袋中，用拍击式均质器均质1 min～2 min；或加入盛有225 mL mTSB 的均质杯中，以8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min。若样品为液态，振荡均匀即可。36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

6.2 分离

将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA 血琼脂平板，36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。

溶血性链球菌在哥伦比亚CNA 血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2 mm～3 mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β 型溶血。

6.3 鉴定

6.3.1 分纯培养

挑取5 个（如小于5 个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB 增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

6.3.2 革兰氏染色镜检

挑取可疑菌落染色镜检。β 型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。

6.3.3 触酶试验

挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β 型溶血性链球菌触酶为阴性。

6.3.4 链激酶试验（选做项目）

吸取草酸钾血浆0.2 mL 于0.8 mL 灭菌生理盐水中混匀，再加入经36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 的可

疑菌的TSB 培养液0.5 mL 及0.25%氯化钙溶液0.25 mL，振荡摇匀，置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36 ℃±1 ℃培养24 h，凝固块重新完全

溶解为阳性，不溶解为阴性，β 型溶血性链球菌为阳性。

6.3.5 其他检验

使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。

7 结果与报告

综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检样中检出或未检出溶血性链球菌。

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