一、目的要求
通过母种（一级种）的制作，掌握其制种的技术。
二、方法与步骤
母种培养基制作流程：
设计培养基配方→材料煮汁或药品溶化→琼脂溶化→混合定容→调节pH值→分装→灭菌→倒斜面→接种→培养→母种（一级种）
l．一级种常用培养基配方
(1)马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）
马铃薯(去皮)200mg，葡萄糖20.0g，琼脂2.0g，水l000mL。
(2)马铃薯硫酸铵培养基
马铃薯200 g，硫酸铵2g，蛋白胨1g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁1g，琼脂20g，水1000mL
（3）马铃薯葡萄糖蛋白胨培养基
马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，维生素B10.5mg,  琼脂20g，水1000mL。
2．培养基分装
培养基配制完毕应即时分装，否则琼脂凝固，无法分装，一级种最常用玻璃试管；要安装好分装装置，常用玻璃漏斗套接乳胶管和尖嘴玻璃接液管，乳胶管上配以止流夹。分装时左手抓握2～3支试管，右手控制接液管插入试管，注入培养基，装培养基量为总试管容量的1/5。分装时应注意不要将培养液沾到试管管口，避免将来发生污染。若有沾粘，则应用干净纱布及时擦净。分装的试管直接加棉花塞封口，棉花应用普通棉花，不能用脱脂棉，棉花塞起到过滤空气的作用，不宜过松或过紧，以封口后手持棉塞轻轻摇动试管不脱落，且旋转拨出顺利为度。棉塞外观要求光滑，不能塞过浅或过深，否则造成操作困难。
3．培养基灭菌和冷却成斜面
一般分装好的试管应当天灭菌，使之呈无菌状态，以免杂菌自繁，造成培养基变质、酸败。灭菌时将试管扎成捆，用牛皮纸或其它防潮纸将整捆试管的棉塞包好，直接放入底部盛水的高压灭菌锅内，加热到压力为l.05kg/cm2，灭菌30min。然后趁热取出试管，斜卧放置，使之自然冷却，凝固成斜面，斜面为试管长的1/2，冷却后即成斜面培养基。
4．一级种的接种培养
将试管中的菌种移接至另外的试管培养基上称为转管，其步骤为：
（1）将待接的斜面试管以及一级种、接种针等放入已消毒的接种箱内。
（2）用75%的酒精溶液棉球擦双手消毒。
（3）左手持住空白斜面试管和一级种，右手夹持棉塞，火焰封口。
（4）将接种针顶端烧红，并将整支接种棒在火焰上过火。
（5）挑取黄豆大小的菌丝琼脂块，迅速移接到空白斜面中央，将棉塞塞回试管。
（6）将已接种好的试管放入恒温培养箱，在22～26℃下培养，长满试管即可作为一级种（母种）使用。
  
   

 

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