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游泳池水微生物检验标准-大肠菌群测定



录入时间:2015-7-2 9:26:28 来源:青岛银河澳门官网入口

第一法:多管发酵法

培养基和试剂

乳糖蛋白胨培养液

伊红美蓝琼脂

革兰氏染色液

推测性试验

1、在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内个加入水样100ml。

2、在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管中各加入水样10ml。

3、轻摇试管使液体充分混匀,置36℃±1℃培养箱中,培养24h。

4、观察每管是否产气,如果不产气则报告为大肠菌群阴性;反之则推测性试验阳性,需做进一步的证实试验。

证实试验

1、平板分离

自推测性试验的阳性管中取一接种环培养液,接种到伊红美蓝琼脂平板上,置于36℃±1℃培养箱培养18~24h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。

2、复发酵试验

挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36℃±1℃培养箱中,培养24h。

3、凡乳糖发酵管最终产酸、产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,为大肠菌群阳性,记下证实试验的阳性管数,查总大肠菌群(MPN)检索表得出1000ml水样中大肠菌群的MPN值。

第二法:滤膜法

1、滤膜灭菌:将滤膜放入含蒸馏水的烧杯中,煮沸灭菌三次,每次15min,前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次,以除去残留溶剂。

2、滤膜灭菌:用121℃高压灭菌20min或用点燃的酒精棉球火焰灭菌。

3、水样过滤:用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,贴放在滤床上,固定好滤器,将100ml水样(如水样含菌数较多,可减少滤水样或将水样稀释)注入滤器中,打开滤器阀门,在一0.5×105  Pa(-0.5大气压)下抽滤。

4、培养:水样滤完后,再抽气约5s,关上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放在乳糖琼脂分离培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者之间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入36℃±1℃恒温箱内培养18~24h。

5、挑取滤膜上符合下列特征的菌落进行革兰氏染色,镜检。

紫红色,具有金属光泽的菌落;

深红色,不带或略带金属光泽的菌落;

淡红色,中心色较深的菌落。

6、将革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液中,于36℃±1℃培养48h,产酸产气者证实为大肠菌群阳性。

7、计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数,在乘以10即为每1000ml水样中的大肠菌群数。   

 

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