1. 浓菌液的有效期该如何确定？
答：药典没有规定。可以通过实验确定有效期。例如，在不同的时间点测定浓菌液的浓度，从而判断其有效期。
2. 药典要求菌液在制备后2小时内使用，若保存在2-8℃的菌悬液可在在24小时内使用，那我们在做验证或阳性对照是要加一定量的菌就没有时间进行平板计数了，该如何确保所加菌量准确？
答：药典对稀释菌液的使用期限作出规定，并不会影响操作过程中稀释菌液的加入。即便不规定，也无法在准确知道菌液浓度的情况下加入试验菌。菌液稀释的实验操作和加入菌液的实验操作应该是在同一次实验中完成的，要使加入的菌量符合药典的规定，可以从浓菌液的制备方法、菌液稀释的方法等方面进行规范，也可以引入浊度比较的方法。
3. 菌悬液能否在倒平板之前确定菌含量？
答：活菌含量是无法确定的。总菌量可以通过比浊的方式确定。
4. 具体从哪些方面进行菌种菌株的特性和纯度确认？如何操作？
答：基层的微生物实验室进行菌种纯度确认可以考虑以下一些方面：1）形态学鉴定，包括菌落形态和染色形态；2）生化鉴定，可以考虑使用API鉴定系统。
5. 黑曲霉冻干菌种如何转种，传代？
答：与其他菌种一样，所不同的是使用的培养基应改为改良马丁琼脂培养基。
6. 干粉状的是否可做第0代使用？
答：只要是菌种保藏机构提供的冻干保藏的菌种，可以确定为第0代。
7. 菌种每次传代都要做纯度、特性等的确认吗？
答：从外部购入的菌种，在进入本实验室的菌种保藏体系时，需要进行纯度和特性的确认。以后的每次传代，可以通过显色培养基做简单的确认即可。
8. 如采用低温保存菌种，需购买哪些设备？能够到省所进行实际操作培训？
答：低温冰箱，应能够提供-70℃的低温。可以到省所来培训。
9. 做方法验证时，工作用菌种能否同时操作，如何防止交叉污染？
答：可以同时操作。避免交叉污染的关键是无菌操作技术。
10. 是否等菌悬液的含菌数出结果后再做适用性等检查？
答：没有必要。可参见问题2。
11. 菌液制备中菌液是否都要验证储存期？
答：稀释菌液可参考药典规定。如要保存浓菌液，则需要验证有效期。
12. 菌种CMCC是否可以用ATCC替代，从省所或中检所购买的菌种是否每次都可以出具规范的COA?
答：中国药典使用CMCC的菌种，并没有规定可以使用其他等效的菌种。省所提供的菌种严格讲属于标准贮备菌种，无法提供ATCC这样的COA。CMCC至今也无法提供这类证明。
13. 铜绿假单胞如何保藏？答：可以使用低温冷冻保存的方法。14. 工作用菌液是否属于亚培养或传代一次？
答：工作用菌液应属于一次传代。
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