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蜡样芽孢杆菌的确证试验



录入时间:2015-4-29 11:33:50 来源:青岛银河澳门官网入口

形态

  挑取纯培养的单个菌落,作革兰氏染色镜检。蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性芽胞大杆菌,大小为(11.3)μm×(35)μm,芽胞呈椭圆形位于菌体中央或偏端,不膨大于菌体,菌体两端较平整,多呈短链或长链状排列。 

生化鉴定

  挑取纯培养的单个菌落,进行酪蛋白分解试验、动力试验、V-P试验、硝酸盐还原试验、糖发酵试验、溶菌酶耐性试验。

根状生长试验

  挑取单个可疑菌落划线接种于营养琼脂平板上,30 ℃±℃培养24 h±2 h。蕈状芽胞杆菌形成根状生长的特征。多数蜡样芽胞杆菌菌株形成粗糙的似毛玻璃状或融蜡状的菌落。

溶血试验

  挑取纯培养的单个可疑菌落接种于TSSB琼脂平板上,30 ℃±℃培养24 h±2 h。蜡样芽胞杆菌菌落为浅灰色,不透明,似白色毛玻璃状,有草绿色溶血环或完全溶血环。苏云金芽胞杆菌和蕈状芽胞杆菌呈现弱的溶血现象,而多数炭疽芽胞杆菌为不溶血,巨大芽胞杆菌为不溶血。

蛋白质毒素结晶试验

  取经30 ℃±℃培养24 h±2 h并于室温放置3 d4 d的营养琼脂培养物少许于载玻片上,滴加蒸馏水混匀并涂成薄膜。经自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30 s后倾去,再通过火焰干燥,于载玻片上滴满0.5%碱性复红,放火焰上加热(微见蒸气,勿使染液沸腾)持续1 min2 min,移去火焰,再更换染色液再次加温染色30 s,倾去染液用洁净自来水彻底清洗、晾干后镜检。

  观察有无游离芽胞(浅红色)和染成深红色的菱形、正方形或其它形状的蛋白结晶体。如发现游离芽胞形成的不丰富,应将培养物置室温2 d3 d再行检查。放置3d4d以上的苏云金芽胞杆菌培养物有大量的结晶体,但是只有在芽胞裂解通过上述染色方法才能见到。然而,除非见到芽胞,否则培养物应在室温继续放置几天以重新检查毒素晶体。其它芽胞杆菌不产生蛋白质毒素晶体。

 

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