冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法,简称冻干法。它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿(ānbù )管中,再在低温下快速将含菌样冻结,并减压抽真空,使水升华将样品脱水干燥,形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封,造成无氧真空环境,最后置于低温下,使微生物处于休眠状态,而得以长期保藏。常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件,因此保藏期长,一般达5~15年,存活率高,变异率低,是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
恢复培养冷冻干燥菌种的方法
一、安瓶管开封
1.用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管。
2.用火焰将安瓿管顶端适度加热。
3.滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。
4.用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。
二、菌株恢复培养
1.用无菌吸管,吸取0.3~0.5ml适宜的液体培养基,滴人安瓿管内,轻轻振荡,使冻于菌体溶解呈悬浮状。
2.取0.1~0.2ml菌体悬浮液,移植于适宜的琼脂斜面/平板培养基上,剩余的菌液,注入适宜的液体培养基内,然后在建议的温度下培养。
3.若未能活化,或活化后有疑问时,请于收到菌种1个月内,通知营养与食品安全所,联系补寄事宜。
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