一、目的

学习并掌握细菌芽孢染色的方法及原理。

二、原理

   细菌的芽孢具有一层结构构致密的芽孢壁，通透性差、着色较难，用普通染色法染色菌体着色而芽孢呈现不染色的轮廓，但特殊处理（加热染色或腐蚀性药物处理）色素即可，透过芽孢壁使芽孢着色，一经着色便不易褪色，脱色时只能脱掉菌体的颜色而保留芽孢的颜色。因此，如再换另一种颜色的染液复染菌体，便会使菌体和芽孢呈不同颜色的鲜明对照。

三、材料

1.菌种 枯草芽孢杆菌。

2.仪器及其他 显微镜，接种环、酒精灯、载玻片、7.6%的孔雀绿染色液、 0.5%的蕃红、石炭酸复红、美蓝、吸水纸、枯草芽孢杆菌、水浴锅或小烧杯与三角架。

四、方法与步骤

   1.孔雀绿蕃红芽孢染色法

（1）涂片经火焰固定，滴定孔雀绿染液于涂片上，加热至产生蒸汽达3~5min (加热时要慢慢来回移动，添加染液勿使涂片干燥)。

(2）水洗后，再用蕃红染液复染1-2min。

  （3）水洗、干燥、镜检、绘图。芽孢被染上绿色，营养体呈红色。
   2.石炭酸复红染色法

（1）试管一支.加蒸馏水3〜4滴，取1〜2环芽抱杆菌于水中，并充分摇荡制成均匀的悬浮液。

   （2）滴加等量3〜4滴石炭酸复红液摇匀，水浴煮沸10min以上。

   （3）取上述加热后的染色菌悬液2〜3环于载玻片上制成涂片，然后经过干燥、火焰固定、水洗。

   （4）美蓝复染3~4min，经水洗、干燥后，镜检，绘图。

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