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冻干菌株的复活和检查



录入时间:2015-3-19 9:12:25 来源:青岛银河澳门官网入口

 

1.复活菌株

选择合适的培养基和培养条件(根据生产商说明)进行复活。冻干菌株的传代次数不得超过5代,从菌种保藏中心购买的冻干菌种为第0代。

1细菌

用无菌吸管吸0.5ml 液体培养基加到冻干菌块上,吹打匀成悬液,将全部悬液移入含有5ml合适的肉汤培养基中。将管中残留的几滴悬液移种到斜面上。在合适的条件下培养,细菌培养温度通常为2537。多数冻干菌株会在几天后长出,但是少数菌会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍。
   2噬菌体

首先应准备18h24h的宿主细菌培养物,往冻干噬菌体中加1.0ml肉汤视宿主细菌而定)混匀,0.1ml悬液到0.9ml肉汤中,依次系列稀释。每个稀释度的稀释液一滴接种到预先准备好的平板上,每平板采用34个稀释度。过夜培养后可出现菌斑。

3霉菌和酵母菌

用无菌吸管吸0.5 ml1ml无菌水到冻干菌块上,将全部内容物移装有5 ml,无菌水的试管中进行复水,2 h或过夜后移种到肉汤或固体琼脂上,在合适的温度下培养,真菌培养温度通常是25。少数培养物会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍。

如菌株在推荐的培养基、培养温度和时间等适宜的条件下培养不生长,须灭菌处理之后方可丢弃。

2.菌种纯度检査和确认

  (1)菌落形态

取复活后的培养物,在相应的鉴别平板或普通非选择性平板上划线分离,培养出单菌落,观察菌落形态是否符合,同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似;对于出现两种或以上形态的菌株,应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养,检测是否重复出现相同特征。
  2细胞形态

对数生长期的培养物的革兰氏染色反应应呈现一致性;细胞形状、大小、鞭毛、荚膜等特征应相似。

  3芽孢大小、位置、形状
   形成芽孢的菌种,其芽孢大小、位置、形状应相似。

  4生化鉴定
   必要时进行生化鉴定等实验。
  (5)污染处理

   如发现菌种有污染,需要分离挑选目标菌株培养成功后将污染培养物做灭菌处理。

 

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