凝集试验
1.玻片法
(1)原理:用已知的诊断血清或血浆在玻片上与待检菌及生理盐水混合,若出现肉眼可见的特异性凝集块,表示该菌即为相应的细菌。
(2) 方法:取一洁净载玻片,用接种环取待检菌培养物,分别与诊断血清及生理盐水混匀,上下摇动玻片数次, 1~3 min 后观察结果。
(3)结果判断: 阳性——待检菌明显凝集,对照菌均匀混浊。阴性——待检菌及对照菌均匀混浊。自凝——测定菌、对照菌均凝集(图3 - 46) 。
(4) 注意事项: 某些细菌菌体表面常有一层表面抗原,如伤寒沙门菌的Vi 抗原及志贺菌属的K 抗原等。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集,从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于1000C 中煮沸1 h ,以破坏其表面抗原,然后再作试验。
2 . 试管法
此法可排除玻片法凝集试验的非特异性凝集,是一种半定量凝集试验。
(1)方法: 取小试管1 0 支,第1 管加入生理盐水0.45 时,再加入0. 05 ml 诊断血清混匀,其余各管均加生理盐水0 . 25 ml ,然后从第1 管中吸出0.25 ml 加入第2 管中,棍匀后再吸出0.25 ml 加入第3 管,依次类推直至第9 管,从第9 管吸出0 . 25 ml 弃去,第10 管不加抗血清为对照管。每管加待检菌菌液(10 X 109 CFU/ ml)0 . 25ml 时,充分振荡混匀后,置37℃水浴4 h , 再置4℃中过夜。
(2) 结果判断:以血清最高稀释度达到(++)凝集者(管内液体澄清,部分凝集块沉于管底)为该菌的凝集效价。若此效价达所用原诊断血清效价一半以上者为阳性。
(3) 注意事项: 脑膜炎奈瑟菌的菌液必须经56℃ 30 min 灭活,以破坏自溶酶。若试验出现低凝集结果时,应将该菌传代数次后,再做实验。
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