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生化鉴定试验——酶类试验



录入时间:2015-3-13 14:52:47 来源:青岛银河澳门官网入口

1.酶试验

(1)原理:具有触(氧化氢酶)菌,能催化氧化,放出新生氧,而形成分子氧,出气泡。

(2) 方法:3 %氧化溶液0.5 ,滴加于不含血液的脂培物上,或取1~3 ml 、滴加入水菌液中。

(3) 果判断:物出气泡者阳性(3 - 37) 。

(4) 注意事: 菌要求新。②红细胞内含有触,可能出假阳性,故不宜用血脂平板上的菌落作触酶试验。③需用已知阳性菌和性菌作。

2.氧化酶试验

(1)原理:氧化(胞色素氧化)胞色素呼吸。具有氧化菌,首先使胞色素C氧化,再由氧化型胞色素C 使胶氧化,生成有色的酿类化合物。

(2) 方法:洁净滤纸一小,涂抹菌苔少,加1 10 g/ L 股溶液于菌落上,。

(3) 果判断: 呈粉色并迅速转为色者阳性(3 - 38) 。

(4) 注意事: 未加抗坏血酸的试剂周新配制(试剂在空气中易生氧化) 。②避免接触含。③不宜采用含葡萄糖的培基上的菌落(葡萄糖酵可抑制氧化活性) 。

3.靛酚氧化酶试验

(1)原理:具有氧化菌,首先使胞色素C 氧化,再由氧化型胞色素C 使甲氨基苯胶氧化,并与α 荼酣合,生成靛酚而呈。

(2) 方法:取靛酚氧化酶试纸条,用无菌水浸湿后,直接蘸取细菌培养物,立即观察结果。

(3) 判断:试纸条在10s 色者阳性(3 - 39) 。

4.凝固酶试验

(1)原理: 金黄色葡萄球菌可生两凝固。一合凝固,合在胞壁上,使血中的纤维蛋白纤维蛋白而附着于菌表面,生凝集,可用玻片法。是菌体生成后放于培基中的游离凝固,能使凝血成凝血酶类,从而使血凝固,可用管法。

(2) 玻片法:取兔或混合人血水各l 滴分置清洁载玻片上,挑取待菌菌落分与血水混。如血中有明粒出水中无自凝象者阳性(3 - 40) 。

(3) 管法:2 支,分加入0 . 5 ml 的血(生理1:4 ) .挑取菌落数个加入定管充分研磨温匀,用已知阳性菌株加入照管. 3 7℃水3~4 h 。凝固者阳性(3-41)。

5. DNA 酶试验

(1)原理: 某些菌可胞外DNA 。DNA 可水解DNA 长链,形成数个核昔酸成的寡核昔酸。长链DNA 可被酸沉淀,而水解后形成的寡核昔酸链则可溶于酸,当在菌落平板上加入酸后,若在菌落周透明,表示菌具有DNA 。

(2) 方法:将待菌点状接DNA 脂平板上.3 5℃18~24 h. 菌生物上加1 mo l/ L (使菌落浸没)。

(3) 果判断: 菌落周透明环为阳性,无透明环为阴(3 - 42) 。

 

(4) 注意事: 杆菌科中的沙雷菌和形杆菌可DNA ,革阳性球菌中,只有金黄色葡萄球菌DNA ,因资鉴别。

6 . 硝酸盐还试验

(1)原理: 硝酸基中的硝酸可被某些为亚硝酸,后者与乙酸作用生成硝酸。硝酸与氨基苯磺酸作用,形成偶氮苯磺酸,再与α 荼胶合成色的N-α 荼胶偶氮苯磺酸。

(2) 方法: 将待菌株接于硝酸基, 35℃孵育1~2 日,加入试剂甲液(氨基苯磺酸和乙酸)和乙液(α 荼肢和乙酸)2 滴,立。

(3) 果判断: 色者阳性(3 - 43) 。若不呈色,再加入少辞粉,如仍不变为红色者阳性,表示基中的硝酸已被为亚硝酸,而分解成氨和氮。加辞粉后变为红色者为阴性,表示硝酸未被原,色反是由于辞粉的原所致。

 

 

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