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    放线菌的形态观察



    录入时间:2008-10-21 11:22:55 来源:google

      一、实验目的和内容
    目的:辨认放线菌的营养菌丝、气生菌丝、孢子丝、孢子的形态;学习放线菌的观察方法。
    内容:用水封计法、玻璃纸法、印片法观察放线菌的形态特征。
    二、实验材料和用具
      细黄链霉菌(streptomycs micuoflavus)又称5406的培养平皿,棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)的玻璃纸培养平皿。
    0.1%美蓝染色液、石炭酸复红染色液;
    盖玻片、载玻片、镊子、接种环、显微镜、涂布器、玻璃纸、打孔器。
    三、操作步骤
    (一)观察自然生长状态的放线菌
    用镊子小心取出用插片法培养的5406菌培养皿中的一张盖玻片,将其背面附着的菌丝体擦净。然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上,用低倍镜、高倍镜观察。找出3类菌丝及其分生孢子,并绘图。注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。
    (二)水封片观察
    取一滴美蓝染色液置于载玻片中央,将用搭片法培养棘孢小单孢菌培养皿中的盖玻片取出,并将有菌面朝下,放在载玻片上,浸在染色液中,制成水封片,用高倍镜观察其单个分生孢子及其基内菌丝,并绘图。
    (三)玻璃纸法的镜检观察
    l.直接玻璃纸观察   分别用5406和棘孢小单孢菌的玻璃纸制片观察。制片时,于载玻片上放一小滴蒸馏水,将含菌玻璃纸片小心剪下一小块,移至载玻片上,并使有菌面向上。在玻璃纸与载玻片间不能有气泡,以免影响观察。将制片于显微镜下观察,先用低倍镜观察菌的立体生长状况,再用高倍镜仔细观察。注意区分5406菌的基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝。观察棘孢小单孢菌时注意把视野调暗,其基内菌丝纤细发亮,其单个分生孢子发暗,直接生长在基内菌丝长出的小梗上。绘图。
    2.印片染色法观察   用镊子取洁净载玻片并微微加热,然后用这微热载玻片盖在长有5406或棘孢小单孢菌的平皿上,轻轻压一下,注意将载玻片垂直放下和取出,以防载玻片水平移动而破坏放线菌的自然形态。反转有印痕的载玻片微微加热固定.用石炭酸复红染色l min,水洗,晾干。用油镜观察。绘图。注意比较两种菌的形态特征有何不同。
    四、注意事项
    1.培养放线菌中要注意,放线菌的生长速度较慢,培养期较长,在操作中应特别注意无菌操作,严防杂菌污染。
    2.玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡,以免影响其表面放线菌的生长,
    3.不同观察方法中严格按要求进行,注意菌体的上下位置。
    五、实验报告
    1.绘图 玻璃纸法、水封片法、印片法及自然生长状态下观察的放线菌形态。
    2.试比较5406菌与棘孢小单孢菌特征的异同。
    六、问题和思考
    1.在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?
    2.用插片法和搭片法如何制备放线菌标本,其主要优点是什么?可否用此法观察其他微生物?为什么?
    3.以玻璃纸覆盖法培养和观察放线菌有何优点?试用此法设计一个观察青霉菌形态的实验。
    注:
    (一)插片法和搭片法培养放线菌
    1.插片法
    (1)制平板、接种:用冷却至约50℃的高氏1号琼脂培养基倒平板(每皿约20mL),可用两种方法接菌:1、先接种后插片:冷凝后用接种环挑取少量斜面上的5406菌孢子,用平板培养基的一半面积作来回划线接种(接种量可适当加大);2、先插片后接种:用平板培养基的另一半面积进行。
    (2)插片及培养:用无菌镊子取无菌盖玻片,在已接种平板上以45°角斜插入培养基内,插人深度约占盖玻片1/2长度(图11-1A)。同时,在另一半未经接种的部位以同样方式插入数块盖玻片,然后接种少量5406菌孢子至盖玻片一侧的基部,且仅接种于其中央位置约占盖玻片长度的一半左右,以免菌丝蔓延至盖玻片的另一侧。将插片平板倒置于28℃,培养3~7d。
    2.搭片法
     (1)开槽及接种:用无菌打孔器在凝固后的平板培养基上打洞数个,并将棘孢小单孢菌孢子划线接种至洞内边缘。
    (2)搭片及培养:在接种后的洞面上放一无菌盖玻片,平板倒置于28℃,培养3~7d(图11—1B)。
    (二)玻璃纸法固体培养5406菌和棘孢小单孢菌
    1.玻璃纸灭菌   将玻璃纸剪成比培养皿直径略小的片状,将滤纸剪成培养皿大小的圆形纸片并稍润湿,然后把 滤纸和玻璃纸交互重叠地放在培养皿中,借滤纸将玻璃纸隔开。然后进行湿热灭菌,备用。
    2.制平板及铺玻璃纸   取冷凝后的高氏1号琼脂培养基,用无菌镊子将预先灭菌的块状玻璃纸平铺至平板培养表面,铺玻璃纸时可用无菌涂布器将玻璃纸与培养基之间的气泡除去。
    3.涂布菌液及培养 取0.l mL的孢子悬液涂布在铺有玻璃纸的平板培养基表面。接种平板倒置于28℃,培养 5~7d。
        
       

     

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