厌氧培养方法介绍
常用的厌氧培养方法主要有二大类,包括化学厌氧培养方法和物理厌氧培养方法,他们分别通过化学和物理的方法来制造厌氧环境,从而有利于厌氧菌的生长繁殖。
(一)化学厌氧培养法
常用为厌氧生物袋培养法:厌氧生物袋是一种特制不透气的塑料袋,袋中装有气体发生管、催化剂小管(内放钯粒)和氧化还原指示剂小管(美蓝).接种好的平板放入袋中,排出袋中气体,卷叠好袋口,用弹簧夹荚紧,然后折断气体发生小管中安瓿,使发生反应产生CO2、H2 等,在催化剂钯的作用下,H2+O2(袋中剩余氧) H2O,这更保证了无氧环境,经0.5h 再折断指示剂管中美蓝液安瓿(美蓝在无氧环境中呈无色美白,在有氧环境中又可变成蓝色的美蓝),如指示剂不变蓝,表示袋内已成无氧环境,此时即可放37℃孵育培养。厌氧产气管成份;碳酸氢钠、磞氢化钾、5%柠檬酸溶液。厌氧指示管成份:0.002%美蓝、10%碱性葡萄糖。催化反应管成份:钯(A 型)。
(二)物理厌氧培养方法
1、厌氧缸培养法
厌氧缸是一个可密封的玻璃缸,顶端有一个抽气口,使用方法如下:A.将接种厌氧菌的平板立即放入厌氧缸。B.在厌氧缸内放入冷催化剂钯粒和美兰指示剂安瓿。C.用真空泵抽去缸中的空气,使缸内大气压降到10%毫米汞柱,然后充入氮气,反复三次。最后充入80%氮气,10%二氧化碳及10%氢气。D.密闭厌氧缸。此时,缸内99%的氧气已被氮气,二氧化碳及氢气置换,残余的氧气,在钯粒催化下与氢气作用生成水,缸壁会有水滴出现。缸内美兰指示剂由浅兰色转变为无色,表示缸内氧气已被驱除。E.放入37℃,培养48 小时后观察结果。
2、厌氧箱培养法
为专门培养厌氧菌的培养箱,现多为全自动控制,当将培养物放入培养箱,关上封闭门后,其自动启动,通过多次抽掉空气,灌入氮气、二氧化碳及氢气,最后形成厌氧环境。培养48 小时后即可取出培养物,观察结果。
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