一、实验目的和内容
目的：了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色法；学习观察细菌运动的方法。
内容：1. 细菌的鞭毛染色法。
2．用压滴法观察细菌的运动。
3．用悬滴法观察细菌的运动。
二、实验材料和用具
普通变形菌(Proteus vulgaris)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
牛肉膏蛋白胨培养基斜面、鞭毛染色液、0.01%美蓝水溶液、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林；显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。
三、操作步骤
(一)细菌鞭毛染色
1．活化菌种  将保存的变形菌在新制备的普通牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2～3次，每次于30℃培养10～15h。活化后菌种备用。
2．制片  在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔(注意不要带培养基)，在载玻片的水滴中轻沾几下。将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。
3．染色
(1)滴加鞭毛染色液A液，染3～5min。
(2)用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。
(3)将残水沥干或用B液冲去残水。
(4)滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60S。
(5)待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。
  4．镜检  先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。菌体为深褐色，鞭毛为褐色。注意观察鞭毛着生位置(镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上染出鞭毛)。
(二)细菌运动的观察
1．压滴法
(1)制备菌液：从幼龄菌斜面上，挑数环菌放在装有1～2mL无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液。
(2)取2～3环稀释菌液于洁净载玻片中央，再加入一环0.01%的美蓝水溶液，混匀。
(3)用镊子夹一洁净的盖玻片，先使其一边接触菌液，然后慢慢地放下盖玻片，这样可防止产生气泡。
(4)镜检：将光线适当调暗，先用低倍镜找到观察部位，再用高倍镜观察。要区分细菌鞭毛运动和布朗运动，后者只是在原处左右摆动，细菌细胞间有明显位移者，才能判定为有运动性。
2．悬滴法
(1)取洁净盖玻片，在四周涂少许凡士林。
(2)在盖玻片中央滴一小滴菌液（图9—1A）
(3)将凹玻片的凹窝向下，使凹窝中心对准盖玻片中央的菌液(图9-1B)，轻轻地盖在盖玻片上，便凹玻片与盖玻片粘在一起(注意液滴不得与凹玻片接触)。
(4)小心将玻片翻转过来，使菌液正好悬在窝的中央。再用火柴棒轻压盖玻片四周使封闭，以防菌液干燥。
（5）镜检：将光线适当调暗，先用低倍镜找到悬滴的边缘后(图9—1D)，再将菌液移至视野中央，换用高倍镜观察，注意细菌是如何运动的，它与分子布朗运动的不同。
四、注意事项
1．鞭毛染色液最好当日配置当日用，次日使用则鞭毛染色浅，观察效果差。染色时一定要充分洗净A液后再加B液，否则背景不清晰。
2．观察细菌的运动，载玻片和盖玻片都要洁净无油，否则会影响细菌的运动。有些细菌，温度太低时不能运动。
五、实验报告
1．绘出你所观察到的细菌的形态及鞭毛着生情况。
2．试描述你所观察的细菌有无运动性，是如何运动的?
六、问题和思考
1．鞭毛染色的菌种为什么要先连续传几代，并且要采用幼龄菌种?
2．根据你的实验体会，哪些因素影响鞭毛染色的效果?如何控制?
3．试设计一实验，如何鉴别某种细菌是否能运动，是否有鞭毛，其鞭毛的着生位置。
  
   

 

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