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肥达氏反应



录入时间:2015-3-3 13:11:14 来源:青岛银河澳门官网入口

 肥达氏反应

【原理】

系以伤寒沙门菌H、O,肖氏沙门菌、希氏沙门菌H 为抗原,检测病人血清中相应抗体的定量凝集反应。

【材料】

病人血清、生理盐水、伤寒沙门菌“H”及“O”菌液,肖氏沙门菌、希氏沙门菌“H”菌液、小试管、32 (4×8)有机玻璃板,0.2ml 微量移液器及移液头。

【方法】

1.取32 孔有机玻璃板一块。

2. 吸取生理盐水0.8 毫升置于小试管中,然后加入0.8 毫升1:10 稀释的病人血清充分混匀,此时血清稀释为1:20。

3.取上述稀释的血清0.8 毫升,分别置0.2 毫升于有机玻璃板每排第一孔内.

4. 吸取0.8 毫升生理盐水,加于血清释释管中,混匀后,此时血清已被稀释成1:40。

5. 1:40 稀释血清0.8 囊升.分别置0.2 毫升于有机破璃板每排第二孔内,以此类推,直至每排第七孔。

6.每排第8 孔不加稀释血清,加0.2 毫升生理盐水作为对照。

7. 加伤寒沙门菌“H”菌液0.2 毫升于第一横排各孔内(从第8 孔开始向前加,下同);伤寒沙门菌“O”菌液0.2 毫升于第二横排各孔内;肖氏沙门菌 “H”菌液于第三横排备孔内;希氏沙门菌“H”菌液于第四横排各孔内。将有机玻璃板加以震荡,使菌液与血清充分混匀。置玻璃板于42℃孵箱半小时后观察结果,井记录凝集效价。

附录:

1SS 琼脂培养基为分离肠道病原菌的强选择鉴别培养基。其组成成分包括:基础培养基、乳糖、枸橼酸钠,硫代硫酸钠、枸橼酸铁、中性红、煌绿和胆盐,其中基础培养基提供氮和碳源,乳糖在鉴别肠道致病菌和非致病菌上起重要作用,中性红为指示剂,它在酸性时呈红色,在碱性时呈淡黄色(PH6.88.0,,色调变更红橙黄)。一般肠道致病菌不分解乳糖,但分解蛋白胨产生碱性物质,所以菌落呈淡黄色,大肠杆菌发酵乳糖时产生酸类,能使指示剂变红,所以菌落呈红色,中性红可为光线破坏,所以应将培养基保存于暗处,其余成分作为选择性抑制剂或缓冲盐。其中枸橼酸钠和煌绿对大肠杆菌的生长,菌体蛋白的合成和糖的利用,都有抑制作用,枸橼酸钠对致病菌无作用,枸橼酸铁对大肠杆菌无抑制作用,但能中和煌绿、中性红等染料的毒性作用。硫代硫酸钠能使大肠杆菌的红色菌落颜色鲜明。胆盐与构橼酸钠合用时,能加强对大肠杆菌的抑制作用。SS 琼脂培养基,对大肠杆菌的抑制作用很强,对肠道病原菌无抑制作用或抑制作用微弱,因此可以增加标本的接种量,从而获得对肠道病原菌较高的阳性分离率。

2. 克氏双糖培养基,下层为含葡萄糖的半固体培养基,可以观察细菌的动力和对葡萄糖发酵的能力,例如大肠杆菌能发酵葡萄糖产酸产气,所以下层变黄,且有气泡存在,同时有动力,细菌沿穿刺线向周围扩散生长。伤寒沙门菌则分解葡萄糖产酸不产气,有动力。上层为含乳糖及硫酸亚铁的固体,主要是观察细菌对乳糖的发酵情况及产生H2S 的能力,例如大肠道杆菌能发酵乳糖,所以上层斜面呈黄色,致病性肠道杆菌如伤寒沙门菌及痢疾杆菌等不能发酵乳糖,斜面不变色,大肠杆菌不产生H2S,故斜面无黑色;肖氏沙门菌产生H2S 则出现黑色。本培养基以酚红为指示剂,酸性时为黄色,碱性时为红色。

3. 伊红美蓝(Eosin Methyi Blue,EMB)琼脂平板为分离肠道病原菌的弱选择鉴别培养基。大肠杆菌发酵乳糖产酸,使伊红与美蓝结合成黑色化合物,显示出紫黑色菌落,周围有一层白环,病原菌不发酵乳糖,菌落透明无色。

 

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