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生物因素对细菌的影响



录入时间:2015-3-2 9:28:57 来源:青岛银河澳门官网入口

 生物因素对细菌的影响

() 细菌对抗生素的敏感性测定 (药敏试验)

【材料】

金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18~24 小时肉汤培养液、琼脂平板培养基、抗生素纸片(浸沾一定浓度的青、链、氯、庆大霉素后,37℃烘干备用)、尖头镊子。

【方法】

1. 取琼脂平板培养基 2 块,分别于其底部玻璃上注明金黄色葡萄球菌及痢疾杆菌,并用蜡笔将平皿底部划分四等分,分别注明青、链、氯、庆大霉素。

2. 将二菌菌液分别涂于上述二个培养基平板上。

3. 镊子经火焰灭菌,镊取各药物纸片,分别贴于涂有细菌的培养基平板表面相应位置上。

4. 置 37℃中孵育18~24 小时,观察纸片周围有无抑菌圈,并比较各抑菌圈的大小,判断二菌对抗生素的敏感度。

附:纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释(NCCLS 1998 年)

NCCLS:美国临床实验室标准化委员会

() 噬菌体对细菌的作用—特异性裂解试验 (平板法)

【材料】

大肠杆菌及痢疾杆菌琼脂斜面培养物、琼脂平板培养基、痢疾杆菌噬菌体。

【方法】

1. 取琼脂平板一只并划分三等,分别标明 1、2、3。

2. 以接种环将痢疾杆菌分别密涂于 1、3 两处,2 处涂布大肠杆菌。

3. 用接种环沾取痢疾杆菌噬菌体加于 1、2 处的中央,另取l 接种环肉汤放于3 处中央。

4. 将此培养基平板置 37℃孵育12~24 小时,观察噬菌斑出现的位置加以分析。

附录:

一、单糖发酵管培养基制备:配制各种单糖成 20%浓度的水溶液,8 磅蒸汽压力下灭菌15 分钟。取pH76 的蛋白胨水1000 毫升,加入16%溴甲酚紫液1 毫升,混合后分装于内置一支玻璃小倒管的10×100 毫米试管,每管约34 毫升,15磅蒸汽压力下灭菌15 分钟。取出后各管贴上颜色标签或在棉塞上染以颜色。在细菌学中,通常红色代表葡萄糖、黄色代表乳糖、白色甘露醇、紫色麦牙糖等,最后以无菌操作加入相应的灭菌糖溶液至每管中,使最终浓度为l%。

二、IMViC试验所需培养基,试剂

(一)培养基

1. 蛋白胨水:将蛋白胨10 克、氯化钠5 克溶解于蒸馏水1000 毫升中,调整酸碱度至 pH7.6,15 磅蒸汽压下灭菌20 分种,若作吲哚试验者,宜采用多胨,因其中含色氨酸较多。

2. 葡萄糖蛋白胨水:溶解蛋白胨5 克,葡萄糖5 克、磷酸氢二钾5 克于蒸馏水 1000 毫升中,调整至pH7.2,滤纸过滤,分装后,经8 磅蒸汽灭菌15 分钟。

3. 枸橼酸盐斜面培养基:溶解磷酸二氢铵0.1 克、硫酸镁0.02 克、磷酸氢二钾 0.1 克、枸橼酸钠0.2 克、氯化钠0.5 克于蒸馏水100 毫升中,加入琼脂2克。加热溶化之。酸碱度调整至pH68,加入指示剂0.5%溴麝香草酚兰酒精溶液2 毫升。摇匀,脱脂棉过滤,分装,15 磅蒸汽压下灭菌20 分钟,趁热制成斜面。制就的枸橼酸盐培养基应呈绿色。

()试剂

1. 甲基红试剂:称取甲基红粉剂 0.1 ,溶于95%酒精300 毫升中,再以蒸馏水稀释至 500 毫升。

2. 对二甲基氨基苯甲醛(吲哚试剂):对二甲基氨基苯甲醛5g 与戊醇或丁醇 75 毫升混合,置5060℃水浴箱中过夜。次日取出,徐徐滴入浓盐酸25 毫升,滴加时随滴随摇。配后放暗处备用。

(三)其他生化反应用培养基

1. 醋酸铅培养基:加热融化2%肉汤琼脂200 毫升,加入硫代硫酸钠0.5克。混合后,15 磅蒸汽压下灭菌20 分钟。待冷至45,无菌操作加入经间歇灭菌的10%醋酸溶液1 毫升。分装、直立静置待凝。

2. 尿素固体培养基:取蛋白胨0.1 克、氯化钠0.5 克,磷酸二氢钾0.2克、琼脂2 克于蒸馏水100 毫升中,加热溶化。调正pH 7.4,脱脂棉过滤。加入0.6%酚红0.2 毫升,混匀,8 磅蒸汽压下灭菌15 分钟。冷至60℃时,每100 毫升加入l0%无菌葡萄糖液l 毫升及20%尿素液1 毫升(尿素液应经蔡氏滤菌器过滤除菌)。混合,分装,每管装2~3 毫升,制成斜面。

(四)常用指示剂的变色范围。

 

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