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空肠弯曲菌检验操作步骤 GB4789.9-2014



录入时间:2015-1-26 10:54:23 来源:国家食品安全标准

 

5.1 样品处理

5.1.1 一般样品

取25g(mL)样品(水果、蔬菜、水产品为50g)加入盛有225mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋中(若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤),用拍击式均质器均质1min~2min,经滤网或无菌纱布过滤,将滤过液进行培养。

5.1.2 整禽等样品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部,并振荡2min~3min,经无菌纱布过滤至250mL离心管中,16000g离心15 min后弃去上清,用10 mL 0.1%蛋白胨水悬浮沉淀,吸取3 mL于100 mLBolton肉汤中进行培养。

5.1.3 贝类

取至少12个带壳样品,除去外壳后将所有内容物放到均质袋中,用拍击式均质器均质1min~2min,取25g样品至225 mLBolton肉汤中(1:10稀释),充分震荡后再转移25mL于225 mLBolton肉汤中(1:100稀释),将1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。

5.1.4 蛋黄液或蛋浆

取25 g(mL)样品于125mLBolton肉汤中并混匀(1:6稀释),再转移25mL于100mLBolton肉汤中并混匀(1:30稀释),同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。

5.1.5 鲜乳、冰淇淋、奶酪等

若为液体乳制品取50g;若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中,用拍击式均质器均质15s~30 s,保留过滤液。必要时调整pH值至7.5±0.2,将液体乳制品或滤过液以20000g 离心30 min后弃去上清,用10 mL Bolton肉汤悬浮沉淀(尽量避免带入油层),再转移至90 mLBolton肉汤进行培养。

5.1.6 需表面涂拭检测的样品

无菌棉签擦拭检测样品的表面(面积至少100 cm2以上),将棉签头剪落到100 mLBolton肉汤中进行培养。

5.1.7 水样

将4 L 的水(对于氯处理的水,在过滤前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸钠溶液)经0.45 μm滤膜过滤,把滤膜浸没在100 mL Bolton肉汤中进行培养。

5.2 预增菌与增菌

在微需氧条件下,36 ℃±1 ℃培养4 h,如条件允许配以100 r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌液的pH值并调整至7.4±0.2,42 ℃±1 ℃继续培养24 h~48 h。

5.3 分离

将24 h增菌液、48 h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于Skirrow血琼脂与mCCDA琼脂平板上,微需氧条件下42 ℃±1 ℃培养24 h~48 h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。

观察24 h培养与48 h培养的琼脂平板上的菌落形态,mCCDA琼脂平板上的可疑菌落通常为淡灰色,有金属光泽、潮湿、扁平,呈扩散生长的倾向。Skirrow血琼脂平板上的第一型可疑菌落为灰色、扁平、湿润有光泽,呈沿接种线向外扩散的倾向;第二型可疑菌落常呈分散凸起的单个菌落,边缘整齐、发亮。空肠弯曲菌显色培养基上的可疑菌落按照说明进行判定。

 

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