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紫外线灭菌



录入时间:2008-10-21 11:01:12 来源:青岛海博

                             紫外线灭菌
(一)目的要求
了解紫外线灭菌的原理和方法
(二)基本原理
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300nm的紫外线都有杀菌能力,其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下,紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联,从而抑制了DNA的复制。另一方面,由于辐射能使空气中的氧电离成[O],再使O2氧化生成臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成过氧化氢(H2O2)。O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大,所以,只适用于无菌室,接种箱,手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。
此外,为了加强紫外线灭菌效果,在打开紫外灯以前;可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%~5%石炭酸溶液,一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落,另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用2%~3%的来苏尔擦洗,然后再开紫外灯照射,即可增强杀菌效果,达到灭菌目的。
(三)器材
1.培养基 牛肉膏蛋白胨平板。
2.溶液或试剂 3%~5%石炭酸或2%~3%来苏尔溶液。
3.仪器或其他用具 紫外线灯。
(四)操作步骤
l.单用紫外线照射
(1)在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关,照射30min,将开关关闭。
(2)将牛肉膏蛋白胨平板盖打开15min,然后盖上皿盖。置37℃培养24h。共做三套。
   (3)检查每个平板上生长的菌落数。如果不超过4个,说明灭菌效果良好,否则,需延长照射时间或同时加强其他措施。
    2.化学消毒剂与紫外线照射结合使用
(1)在无菌室内,先喷洒3%~5%的石炭酸溶液,再用紫外线灯照射15imn。 
(2)无菌室内的桌面,凳子用2%~3%来苏尔擦洗,再打开紫外线灯照射15min。
    (3)检查灭菌效果[方法同“单用紫外线照射”(3)]。
    因紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用,对皮肤有刺激作用,故不能直视紫外线灯光下工作。
(五)实验报告
1.结果
记录两种灭菌效果于下表中
处理方法 平板菌落数
1   2   3 灭菌效果比较
紫外线照射
3%~5%石炭酸+紫外线照射    
2%~3%来苏尔+紫外线照射    
 
2.思考题。
(1)细菌营养体细胞和细菌芽孢对紫外线和的抵抗力会一样吗,为什么?
(2)你知道紫外线灯管是用什么玻璃制作的?为什么不用普通灯用玻璃?
(3)在紫外灯下观察实验结果时,为什么要隔一块普通玻璃?
 
   

 

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