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β型溶血链球菌检测培养基(GB4789.11-2014)



录入时间:2014-12-24 11:05:29 来源:银河澳门官网入口

 

A.1改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基(Modified tryptone soybean broth,mTSB)

A.1.1基础培养基(胰蛋白胨大豆肉汤TSB)

A.1.1.1成分

 

胰蛋白胨


17.0 g

大豆蛋白胨

3.0 g

氯化钠

5.0 g

磷酸二氢钾(无水)

2.5 g

葡萄糖

2.5 g

蒸馏水

1000.0 mL

A.1.1.2制法

将A.1.1.1中各成分溶于蒸馏水中,加热溶解,校正pH至7.3±0.2,121 ℃灭菌15 min,备用。

A.1.2 抗生素溶液

A.1.2.1 多黏菌素溶液

称取10 mg多黏菌素B于10 mL灭菌蒸馏水中,振摇混匀, 充分溶解后过滤除菌。

A.1.2.2 萘啶酮酸钠溶液

称取10 mg萘啶酮酸于10 mL 0.05 mol/L氢氧化钠溶液中,振摇混匀,充分溶解后过滤除菌。

A.1.3 完全培养基

A.1.3.1 成分

 

胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)


1 000.0 mL

多黏菌素溶液

10.0 mL

萘啶酮酸钠溶液

10.0 mL

A.1.3.2 制法

无菌条件下,将A.1.3.1中各成分进行混合,充分混匀,分装备用。

A.2 哥伦比亚CNA血琼脂(Columbia CNA blood agar)

 

A.2.1 成分

 

胰酪蛋白胨


12.0 g

动物组织蛋白消化液

5.0 g

酵母提取物

3.0 g

牛肉提取物

3.0 g

玉米淀粉

1.0 g

氯化钠

5.0 g

琼脂

13.5 g

多黏菌素

0.01 g

萘啶酸

0.01 g

蒸馏水

1000.0 mL

 

A.3.1.2 制法

将基础培养基成分溶解于蒸馏水中,加热促其溶解。121 ℃高压灭菌15 min。

A.3.2 无菌脱纤维绵羊血

无菌操作条件下,将绵羊血加入到盛有灭菌玻璃珠的容器中,振摇约10min,静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。

A.3.3完全培养基

A.3.3.1 组分

基础培养基

1000.0 mL

无菌脱纤维绵羊血

50.0mL

A.3.3.2 制法

当基础培养基的温度为45℃左右时,无菌加入绵羊血,混匀。校正pH至7.2±0.2。倾注15 mL于无菌平皿中,静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4 h,或在4℃冷藏不得超过7 d。

A.4  革兰氏染色液

A.4.1  结晶紫染色液基础培养基

A.4.1.1  成分

结晶紫

1.0 g

95%乙醇

20.0mL

1%草酸铵水溶液

80.0mL

A.4.1.2 制法

将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。

A.4.2革兰氏碘液

A.4.2.1成分

1.0 g

碘化钾

2.0 g

蒸馏水

300.0mL

A.4.2.2 制法

将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL。

 

A.4.3.1 成分

 

沙黄


0.25g

95%乙醇

10.0mL

蒸馏水

90.0mL

A.4.3.2 制法

将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。

A.4.4染色操作步骤

将涂片在酒精灯火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗;滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;滴加95%乙醇脱色,约15 s~30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗;滴加复染液,复染1min,水洗后进行干燥,镜检。

A.5胰蛋白胨大豆肉汤(Tryptone soybean broth, TSB)

A.5.1 成分

 

胰蛋白胨


17.0 g

大豆蛋白胨

3.0 g

氯化钠

5.0 g

磷酸二氢钾(无水)

2.5 g

葡萄糖

2.5 g

蒸馏水

1000.0 mL

A.5.2制法

将A.5.1中各成分溶于蒸馏水中,加热溶解,校正pH至7.3±0.2,121 ℃灭菌15 min,分装备用。

A.6草酸钾血浆

 

A.6.1 成分

 

草酸钾


0.01 g

人血

5.0 mL

A.6.2 制法

草酸钾0.01 g放入灭菌小试管中,再加入5 mL人血,混匀,经离心沉淀,吸取上清液即为草酸钾血浆。

A.7 0.25%氯化钙(CaCl2)溶液

 

A.7.1 成分

 

 氯化钙(无水)


22.2 g

蒸馏水

1000.0 mL

A.7.2 制法

称取22.2g氯化钙(无水)溶于蒸馏水中,分装备用。

A.8 3%过氧化氢(H2O2)溶液

 

A.8.1 成分

 

30%过氧化氢(H2O2)溶液


100.0 mL

蒸馏水

900.0 mL

A.8.2 制法

吸取100mL 30%过氧化氢(H2O2)溶液,溶于蒸馏水中,混匀,分装备用。

 

 

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