双歧杆菌培养液制备

      挑取BBL琼脂上纯培养的双歧杆菌接种于PYG液体培养基，同时用未接种菌的PYG液体培养基做空白对照，绝对厌氧，36±1℃ 培养48±2 h。

标准液配制

乙酸标准溶液：准确吸取乙酸5.70ml 加水稀释至100.0ml，摇匀，附录Ｂ方法进行标定，配成约1.0 mol/L的乙酸标准溶液。乙酸使用液：将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至20.0 mmol/L。

乳酸标准溶液：准确吸取含量为85-90%的乳酸0.84 ml，加水稀释至100.0ml，摇匀，配成1.0 mol/L的乳酸标准溶液。乳酸使用液：将乳酸标准溶液用水稀释至20.0 mmol/L。

乙酸的处理

       取双歧杆菌培养液2.0-3.0ml放入10ml离心管中，加入0.2ml 50％硫酸溶液，混匀，加入2.0ml丙酮，混匀后加过量氯化钠，剧烈振摇1min，再加入2.0ml乙醚，振摇1min后，于3000r／min离心5min，将上清液转入另一试管中，下层溶液用2.0ml丙酮和2.0ml乙醚重复提取2次，合并有机相，于40℃水浴中用氮气吹至少量溶液存在，用丙酮定容至1.0 ml，混匀后备用。同样操作步骤处理乙酸标准和空白培养液。

乳酸的处理

         取双歧杆菌培养液2.0-3.0ml放入10比色管中，100℃水浴10min，加入0.2mL 50%硫酸溶液，混匀，加入1.0mL甲醇，于58℃水浴30min后加水1.0mL，加三氯甲烷1.0mL，振摇3min，3000r/min离心5min，取三氯甲烷层分析。同样操作步骤处理乳酸标准和空白培养液。

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