样品制备
样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
以无菌操作称取25g样品,放入于装有225 mL0.85%生理盐水的灭菌锥形瓶内,制成1:10的样品匀液。
稀释步骤
用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1.0 mL,沿管壁缓慢注于装有9mL0.85%生理盐水的无菌试管中(注意吸管尖端不要触及稀释液),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头,按上述操作顺序,做10倍递增样品匀液,如此每递增稀释一次,即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个连续的适宜稀释度,每个稀释度吸取0.1 mL稀释液于BBL琼脂平板进行表面涂布, 每个稀释度作两个平皿。绝对厌氧,36±1℃ 培养48±2 h,培养后选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。