菌液制备 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物，加入适量的0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂表面的培养物洗脱，并将菌悬液移至无菌试管内， 然后用 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每1ml 含菌数约为108cfu 的菌悬液；若为液体培养物，离心收集菌体，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每1ml 含菌数约为108cfu 的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml 含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，加入适量的含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数108cfu 的孢子悬液。测定1ml 菌悬液中所含的菌数。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24 小时内使用。黑曲霉的孢子悬液可保存在2～8℃，在1 周内使用。

供试品接种 抑菌效力可能受试验用容器特征的影响，如容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此，只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同时容器便于按无菌操作技术接入试验菌液、混合及取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器中进行贮存。若因供试品的性状或每个容器装量等因素需将供试品转移至无菌容器时，该容器的材质不得影响供试品的特性（如吸附作用），特别应注意不得影响供试品的pH，pH 对抑菌剂的活性影响很大，同时容器的口径大小应便于供试品的转移及混匀。

取包装完整的供试品至少 5 份，直接接种试验菌，或取适量供试品分别转移至5 个适宜的无菌容器中（若试验菌株数超过5 株，应增加相应的供试品份数），每一容器接种一种试验菌， 1g 或1ml 供试品中接菌量为105～106cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的1%,充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布，然后置20～25℃避光贮存。

存活菌数测定 根据产品类型，按规定的间隔时间，分别从上述每个容器中取供试品1ml(g)，测定每份供试品中所含的菌数，测定细菌用胰酪胨大豆琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。存活菌数测定方法及方法适用性试验照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法行，菌液制备同培养基适用性检查，方法适用性试验试验菌的回收率不得低于70%。

根据存活菌数测定结果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg 值，试验结果按有效数字的修约规则进舍，保留小数点后1 位有效数字。

结果判断 供试品抑菌效力评价标准中的“减少的lg 值”是指各间隔时间测定的菌数lg 值与1ml(g)供试品中接种的菌数lg 值的相差值。

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