原理:铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶,可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨,滴加纳氏试剂(碘化汞钾),氨(NH4+)在碱性条件下与碘化汞钾作用,生成红色的络合物。
操作:将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中,在36℃±1℃下培养20h~24h。然后向每支试管培养物加入1~2滴钠氏试剂,检查各试管的产氨情况,如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化,则为阳性结果,否则为阴性。
原理:氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素C氧化,再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化,生成有色的醌类化合物。
操作:取2~3滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒,将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在10秒内显深蓝紫色的视为阳性反应。也可以按照商品化氧化酶测试产品的说明书进行该项测试。
产荧光素实验(金氏B培养基)
原理:蛋白胨提供氮源;磷酸盐促进荧光素的产生并抑制绿脓色素的产生;硫酸镁为荧光素的产生提供必须的阳离子;琼脂使培养基的凝固。
操作:将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏B培养基上,于36℃±1℃恒温箱培养24h~5d。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光,将5d内产生荧光的菌落记录为阳性。
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