检样经均质处理后,及时接种培养,进行增菌、产毒,同时进行毒素检测试验。
肉毒毒素检测 肉毒毒素的毒性极强,所以处理所有被怀疑含该毒素的材料时必须谨慎。
标本的采集、运输及保存
食品标本:可疑食品采集后应尽快送检,密封食品,直至检验开始以前不要启封,非密封食品应采集于灭菌容器中,若需要远运,标本应装入严密的容器,置于冰壶中冷藏。
体液或组织标本:发生肉毒中毒时,若能直接从患者血清中检出肉毒毒素,是最可靠的实验室诊断。采血量应足够中和试验用。血清、呕吐物、粪便及尸体标本均须装入灭菌容器中,尽快送检。水产动物的脏器标本应以消化道为主。
土壤:以灭菌工具由地表面下10~20cm处取土,装入灭菌容器。
标本的处理
为了尽量保持肉毒毒素的稳定,稀释液应用明胶磷酸盐缓冲液。
血清分离后可直接供作肉毒毒素检测试验,无需另加处理。
液状检样可直接离心,固体或半流动检样须加适量(例如等量、倍量或 5倍量、10 倍量)明胶磷酸盐缓冲液浸泡、研碎,然后离心,取上清液进行检测。 另取一部分上清液,调 pH6.2,每 9 份加 10%胰酶(活力 1:250)水溶液 1份,混匀,不断轻轻搅动,37℃作用 60 min,进行检测。(E 型及非蛋白分解的B、F型肉毒梭菌产生的前体毒素,做动物试验时,须激活,使之变为活化毒素。)
肉毒毒素方法介绍
小鼠生物检测:是目前唯一被公认的确认肉毒毒素的方法,是检测肉毒毒素的金标准。
基于免疫化学的检测方法(A、B、E、F型肉素的检测):
ELISA法:用来检测肉毒毒素已经有20多年了,但是常规ELISA的检测灵敏度远远低于小鼠生物检测。目前试用的有amp-ELISA、DIG- ELISA,提高了灵敏度,此方法已被用于检测食物样品,检测时间大约需要6h。但是存在型间交叉的问题,阳性样品仍需小鼠生物检测法进行确认。
PCR法:目前还没有用此方法检测样品,原因是其灵敏度非常高,容易受样品基质的干扰得至假阳性结果。检测纯水中的毒素只需3h。
目前已发表或试用的其它方法:免疫电泳法、放射免疫法、琼脂凝胶扩散法等。但这些方法的敏感性都不如小鼠生物检测法高
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