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大肠埃希氏菌增菌分离培养基原理



录入时间:2014-9-9 11:59:59 来源:银河澳门官网入口

增菌

以无菌操作取检样25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉汤的均质袋中,在拍击式均质器上连续均质1~2 min。于36±1℃培养18~24h。同时做阳性及阴性对照。

 

       

mEC肉汤

胰蛋白胨提供碳氮源;新生霉素、3号胆盐抑制革兰氏阳性菌,特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;乳糖是可发酵的糖类;磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂;氯化钠可维持均衡的渗透压。

分离

取增菌后或筛选试验阳性的mEC+n肉汤,分别划线或适当稀释后取0.1mL涂布接种于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157显色琼脂平板上,于36±1℃培养18~24h,观察菌落。必要时将混合菌落分纯。在CT-SMAC平板上,发酵山梨醇的菌落为红色;典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色,用接种针挑起时无拉丝现象。在改良CHROMagar O157显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落,中心呈淡紫色-紫红色,边缘无色或浅灰色。

改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂

蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;山梨醇为可发酵的糖类;三号胆盐、结晶紫抑制革兰氏阳性菌,亚碲酸钾抑制非0157的大肠杆菌,头孢克肟抑制变形杆菌;中性红为pH指示剂;琼脂是培养基的凝固剂。

增菌后的肉汤在取样前,应轻微摇晃混匀。

划线时应多次往返,保证分离效果。

大部分非O157 E.coli发酵山梨醇,仍有6%不发酵山梨醇,它们与摩根氏菌和哈夫尼亚菌一样在CT-SMAC上表现为与O157相同的菌落特征。

 

 


 

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