增菌
以无菌操作取检样25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉汤的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1～2 min。于36±1℃培养18～24h。同时做阳性及阴性对照。
mEC肉汤
胰蛋白胨提供碳氮源；新生霉素、3号胆盐抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；乳糖是可发酵的糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
分离
取增菌后或筛选试验阳性的mEC+n肉汤，分别划线或适当稀释后取0.1mL涂布接种于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157显色琼脂平板上，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。必要时将混合菌落分纯。在CT-SMAC平板上，发酵山梨醇的菌落为红色；典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色，用接种针挑起时无拉丝现象。在改良CHROMagar O157显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落，中心呈淡紫色-紫红色，边缘无色或浅灰色。
改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂
蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；山梨醇为可发酵的糖类；三号胆盐、结晶紫抑制革兰氏阳性菌，亚碲酸钾抑制非0157的大肠杆菌，头孢克肟抑制变形杆菌；中性红为pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
增菌后的肉汤在取样前，应轻微摇晃混匀。
划线时应多次往返，保证分离效果。
大部分非O157 E.coli发酵山梨醇，仍有6%不发酵山梨醇，它们与摩根氏菌和哈夫尼亚菌一样在CT-SMAC上表现为与O157相同的菌落特征。
上一篇：生长率测定法
