样品制备
取样前消毒样品包装的开启处和取样勺。无菌称取样品100g至2L的样品稀释瓶中,加人900mL预热到45 °C的灭菌蒸馏水,或者将样品直接称量到装有9倍预热到45 ℃的灭菌蒸馏水的样品 稀释瓶中,振摇使样品充分混匀,36℃±1℃培养18 h〜22 h。
选择性増菌
移取培养18 h〜22 h的悬液1 mL加人10 mL克罗诺杆菌肉汤中,36℃±1℃培养18 h〜22 h。
初筛结果观察
将培养后的试管置于366 nm波长的UV灯下观察是否产生荧光,以空白样品作为对照。如果无 荧光产生,阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)为阴性;如果产生荧光,则以下列步骤进行操作。
可疑菌分离
轻轻混匀增菌液,每份增菌液用3 mm接种环(10μL)分别接种2个克罗诺杆菌显色平板,三区法 或四区法划线,以得到单个菌落。将平板置36 ℃±1 ℃培养18 h〜22 h。
结果判别
观察平板上阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)的典型形态。在克罗诺杆菌显色平板上为蓝绿色菌落,圆 形,直径1 mm〜2 mm。
可疑菌产黄色素试验
从显色平板上挑取1〜5个可疑菌落分别接种到TSA平板上,25℃±1℃培养48 h〜72 h。
可疑菌生化鉴定实验
从TSA平板上挑取黄色菌落,革兰氏染色,做氧化酶试验。革兰氏染色阴性,氧化酶试验阴性,应用生化鉴定试剂或其他细菌鉴定系统进行鉴定。
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