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阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)定量检验(MPN法)



录入时间:2014-8-14 11:06:54 来源:银河澳门官网入口

方法和取样量


定量检验是应用“三管”增菌法,检验和定量样品中极少量的阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)。检验需 要333 g样品。

 

样品制备


取样前消毒样品包装的开启处和取样勺。无菌称取样品100 g,10 g和1 g各三份分别加人2 L, 250 mL和125 mL的样品稀释瓶中,加入9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水(1 : 10稀释),或者将样品直 接称量到装有9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水的样品稀释瓶中,振摇使样品充分混匀,36℃±1℃培养18h~22h。

 

选择性增菌


分别移取培养18h~22h的悬液各1.0 mL加人9.0 mL克罗诺杆菌肉汤中,36℃ ± 1 °C培养 24 h±2 h,取1.0 mL灭菌生理盐水,加人9.0 mL克罗诺杆菌肉汤中作为空白对照。

 

初筛结果观察


将培养后的试管置于366 nm波长的UV灯下观察是否产生荧光,以空白样品作为对照。如果无 荧光产生,阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)为阴性;如果产生荧光,则以下列步骤进行操作。

 

可疑菌分离


轻轻混匀增菌液,每份增菌液用3 mm接种环(10μL)分别接种2个克罗诺杆菌显色平板,三区法 或四区法划线,以得到单个菌落。将平板置36 ℃±1 ℃培养18 h〜22 h。

 

结果判别


观察平板上阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)的典型形态。在克罗诺杆菌显色平板上为蓝绿色菌落,圆 形,直径1 mm〜2 mm。

 

可疑菌产黄色素试验


从显色平板上挑取1〜5个可疑菌落分别接种到TSA平板上,25℃±1℃培养48 h〜72 h。


可疑菌生化鉴定实验


从TSA平板上挑取黄色菌落,革兰氏染色,做氧化酶试验。革兰氏染色阴性,氧化酶试验阴性,应 用生化鉴定试剂或其他细菌鉴定系统进行鉴定。

 

 

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