试剂
(1)0.05mol/L磷酸盐缓冲液pH6.5+500mg/L半胱氨酸-HCl。
(2)6mg/mLNaF+10mg/mL碘乙酸钠或钾
(3)果糖-6-磷酸盐(钠盐,70%-98%纯度)80mg/mL水溶液。
(4)盐酸羟胺(Hydroxy Lamine-HCl) 139mg/mL水溶液,使用时以NaOH中和至pH6.5。
(5)15g/100mL 三氯乙酸(TCA) 水溶液。
(6)4mol/L HCl。
(7)0.5 g/100mL FeCl3·6H2O溶于0.1mol/L HCl中。
1、挑取BBL琼脂上纯培养的双歧杆菌接种到TPY液体培养基, 绝对厌氧,36±1℃ 培养72h±3h。从10mL TPY培养液于3000r/min离心5min,弃上清液,细胞用上述试剂(1)洗涤2次,然后悬浮于1.0mL试剂(1)中。将盛有细胞悬液的容器置于一冰浴内,用超声波处理20min,以破碎细胞。然后在超声波处理物中加入试剂(2)和试剂(3)各0.25mL,置于37℃保温30 min。保温后在溶液中入1.5mL试剂(4),置室温5 min。加入试剂(5)和试剂(6)各1mL,置室温5 min。然后加入1mL试剂(7)观察溶液颜色。
2、结果判定:经以上程序测定如显红褐色或红紫色,则果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶为阳性,否则为阴性。
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