增菌

         以无菌操作取检样25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉汤的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1～2　min。于36±1℃培养18～24h。同时做阳性及阴性对照。

       CCP:无菌操作，阴阳行对照避免交叉污染。

分离

      取增菌后或筛选试验阳性的mEC+n肉汤，分别划线或适当稀释后取0.1mL涂布接种于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157显色琼脂平板上，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。必要时将混合菌落分纯。在CT-SMAC平板上，发酵山梨醇的菌落为红色；典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色，用接种针挑起时无拉丝现象。在改良CHROMagar O157显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落，中心呈淡紫色-紫红色，边缘无色或浅灰色。

CCP:

增菌后的肉汤在取样前，应轻微摇晃混匀。

划线时应多次往返，保证分离效果。

涂布时应适当稀释。

注意区分典型菌落，必要十分纯。大部分非O157 E.coli发酵山梨醇，仍有6%不发酵山梨醇，它们与摩根氏菌和哈夫尼亚菌一样在TC-SMAC上表现为与O157相同的菌落特征。

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