在24和48h时,挑取BLEB上的菌落划线接种于任何一种含七叶苷的选择分离培养基上：OXA、PALCAM、MOX或加入七叶苷和三价铁的LPM。以上含七叶苷的培养基根据具体要求而选用。OXA、PALCAM、MOX平板接菌后放置于35℃培养24-48小时，含七叶苷和三价铁的LPM平板接菌后放置于30℃培养24-48小时。特别推荐以下单增李斯特氏菌与绵羊李斯特氏菌所用的选择性显色培养基，例如BCM、ALOA等培养基培养48小时( 也可培养24小时)，这样可以减少绵羊李斯特氏菌掩盖单增李斯特氏菌。
在含七叶苷的培养基上，李氏菌呈黒色，菌落周围具有黒色的环。一些其它的细菌在两天以后或更长的时间，能够形成淡棕黒色的菌落。
从OXA、PALCAM、改良LPM培养基或MOX培养基上，挑取5个典型菌落划线接种到TSAye培养基上，分离纯化单菌落。同样也可划线接种到BCM培养基，单增李斯特氏菌呈蓝色，而绵羊李斯特氏菌在食品中不常见。单增李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌在ALOA培养基下都呈蓝色且在菌落周围有酯酶环。在传统的检测方法中，利用TSAye培养基进行菌落纯化是必须的，因为选择性培养基上分离出的菌落仍有可能包涵有其它细菌。至少挑取5个菌落，由于在同一样品中可能含有几种李斯特氏菌。BCM和ALOA培养基可以减少挑取的菌落数。运用商业的Confirmatory培养基，或传统的木糖/鼠李糖发酵肉汤或琼脂，可以区别单增李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌。TSAye平板需在30℃培养24-48小时，若不需观察运动，也可在35℃培养。
从上面FDA的方法中，可知所采用的选择性分离平板为OXA或PALCAM或MOX或改良LPM培养基，从中选取一即可，同时FDA特别重点推荐采用李斯特氏菌显色培养基。
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