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致泻大肠埃希氏菌标本处理与多重PCR



录入时间:2014-4-4 11:26:13 来源:银河澳门官网入口

标本处理

刮取营养平板上的过夜新鲜培养物1 环~2 环,至装有1 mL0.85%灭菌生理盐水的Eppendorf 管内,混匀。4 ℃~8 ℃,12 000 r/min 离心15 min,弃去上清。沉淀加入100 μL 灭菌去离子水中,混匀。100 ℃煮沸12 min,12 000 r/min离心5 min,上清即为PCR 扩增模板,可直接用于PCR 反应。

多重PCR

五种致泻大肠埃希氏菌目的基因多重PCR 扩增加样体系见表5。PCR 反应条件:预变性94 ℃ 5 min。变性94 ℃ 30 s,复性63 ℃ 30 s,延伸72 ℃ 1.5min,30 个循环。最后72 ℃延伸5 min

 

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