样品处理

冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min 或在2 ℃～5 ℃不超过18 h 解冻，

若不能及时检验，应放于-15 ℃左右保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃～5 ℃冰箱保存，24 h 内检验。

样品制备称取样品25 g，放入盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mLPBS 或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为10 倍系列稀释选取3 个适宜连续稀释度的样品匀液，各吸取1mL，分别接种于3 管胰酪胨大豆多粘菌素肉汤接种MYP 琼脂平板

确证试验

查MPN 表

报告结果

30 ℃±1 ℃ 24 h～48 h

30 ℃±1 ℃ 48 h±2 h

检样

25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀，作为1:10 的样品匀液。

样品的稀释

吸取上述1:10 的样品匀液1 mL 加到装有9 mL PBS 或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100 的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1mL 无菌吸管或吸头。

样品接种

取三个适宜连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），接种于10 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中，每一稀释度接种3 管，每管接种1 mL（如果接种量需要超过1 mL，则用双料胰酪胨大豆多粘菌素肉汤）。于30 ℃±1 ℃培养48h±2 h。

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