1.抗原的准备
志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。志贺氏菌属主要有菌体（O）抗原。菌体O 抗原又可分为型和群的特异性抗原。
一般采用1.2﹪～1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。
备注1：一些志贺氏菌如果因为K 抗原的存在而不出现凝集反应时，可挑取菌苔于1 mL 生理盐水做成浓菌液，100℃煮沸15 min～60 min 去除K 抗原后再检查。
备注2：D 群志贺氏菌既可能是光滑型菌株也可能是粗糙型菌株，与其他志贺氏菌群抗原不存在交叉反应。与肠杆菌科不同，宋内氏志贺氏菌粗糙型菌株不一定会自凝。宋内氏志贺氏菌没有K 抗原。
2 凝集反应
在玻片上划出2 个约1cm×2cm 的区域，挑取一环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1 滴抗血清，在另一区域下部加入1 滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并对着黑色背景进行观察，如果抗血清中出现凝结成块的颗粒，而且生理盐水中没有发生自凝现象，那么凝集反应为阳性。
如果生理盐水中出现凝集，视作为自凝。这时，应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验。
如果待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征，而其血清学试验为阴性的话，则按5.5.1 备注1 进行试验。
3 血清学分型（选做项目）
先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则再用相应各群多价血清分别试验。先用B 群福氏志贺氏菌多价血清进行实验，如呈现凝集，再用其群和型因子血清分别检查。如果B 群多价血清不凝集，则用D 群宋内氏志贺氏菌血清进行实验，如呈现凝集，则用其Ⅰ相和Ⅱ相血清检查；如果B、D 群多价血清都不凝集，则用A 群痢疾志贺氏菌多价血清及1～12 各型因子血清检查，如果上述三种多价血清都不凝集，可用C 群鲍氏志贺氏菌多价检查，并进一步用1～18 各型因子血清检查。
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